几种水稻田土壤微生物总DNA提取方法比较.pdfVIP

维普资讯 第 l5卷第 4期 江 苏 大 学 学 报(医 学 版) Vo1．15 No．4 2005年 8月 JournalofJiangsuUniversity(medicine) Aug．2005 几种水稻 田土壤微生物总 DNA提取方法的比较 顾华杰 ，李玉祥 ，赵明文 ，潘根兴 (南京农业大学 1．农业部农业环境微生物工程重点开放实验室；2．农业资源与生态环境研究所，江苏 南京 210095) [摘 要] 目的：使人们在提取土壤总DNA时，可以根据不同的要求选用不同的方法。方法：选用了5种现在较常 用的土壤微生物总 DNA提取方法从水稻田土壤中提取总 DNA，并对5种方法提取的DNA的质量和数量进行 比较评 价。结果：5种方法都可以从土壤中提取到长度大于48kb的DNA片段 ，但不同方法提取的DNA的产量存在明显差 异。土壤总DNA都不需要纯化就可以用于PCR扩增，使用细菌 16SrDNA基因的引物可以扩增得到相应的片段。结 论：Bourrain法和Martin—Laurent法可以较快地提取出DNA，Martin—Laurent法提取的DNA的量最多，Tiedje法和 Jans— sen法提取的DNA片段最大，Janssen法提取的DNA纯度最高，Reddy法提取的DNA的完整性和PCR扩增效果最好。 [关键词] 水稻田土壤；微生物；方法比较；DNA提取 [中图分类号] Q939．96 [文献标识码] A [文章编号] 1671—7783(2005)04—0300—06 Comparison ofM ethodsofDNA Extraction from PaddySoil GUHua-fie，LIYu—xiang ，ZHAOMing—wen，PANGen—xing (1．KeyLabofMicrobiologicalEngineeringofA culturalEnvironment，NanjingAgriculturalUniversity； 2．InstituteofResources，EcosystemandEnvironmentofAgriculture，NanjingAgriculturalUniversity，NanjingJiangsu210095，China) [Abstract] Objective：TomakeitpossiblethatwhenDNA isextractedfrom soil．differentmeth0ds could bechosenaccordingtodifferentdemands、Methods：Inthisexperiment fivedifferentmethodsc0m． ． monlyusedtoextractDNA rfom soilwerechosen toextractDNA rfom paddy soil ． Then thequalityand quantityofDNA werecomparedtoestimatethefivemethods、Results：DNA extractedbyfivemethodswere allgreaterthan48kb insize，buttheyieldsweredifferent．Subsequently． theyweredirectlvused astern． platesforPCR amplificationwithoutpuri