MALDI-TOF MS和电子光谱技术研究海兔肝铁蛋白亚基电离和释放铁动力学特性.pdfVIP

维普资讯 第35卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究报告 第 12期 2007年 12月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 1745—1750 MALDI-TOFMS和 电子光谱技术研究 海兔肝铁蛋白亚基电离和释放铁动力学特性 黄 琳 陈旭 林 青 朱斌琳 黄河清 (厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室 ； 化学化工学院固体表面物理化学国家重点实验室，化学生物学福建省重点实验室 ，厦门361005) 摘 要 选用肽质量指纹谱 (peptidemassfingerprint，PMF)技术鉴定质谱纯海兔肝铁蛋白(1iverferritinof ia，ALF)。来源于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI—TOFMS)仪中的激光和基质芥子酸协 同解吸海兔肝铁蛋白(ALF)为带双电荷、单电荷[M+H]和二聚体的亚基离子，并可供质谱分析。ALF亚基 的质荷比m／z分别为9784．03[M+2H]“、19678．42[M+H]和39387．80[2M+H] ，其中亚基分子量 [M+H]略小于鲨鱼肝铁蛋白(1iverferritinofshark，SLF)。在弱碱介质 (pH8．0)条件下，电子光谱技术研 究指出，抗坏血酸以1／2级反应方式参与ALF释放铁全过程 ，同时又使 ALF以一级反应动力学方式释放铁， 呈现两种不同的速率。推测这一异常现象可能与ALF含低铁量、亚基调节能力和海兔的进化地位有关。 关键词 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱，亚基解离，释放铁，动力学，进化 1 引 言 在 自然界中，多数动植物及微生物机体中均存在着一种高效维持体内铁平衡的蛋白质，简称铁蛋白 (ferritin)¨．2J。铁蛋 白分子结构由蛋白壳、铁核和电子隧道组成，其中蛋 白壳由24个亚基组成，并表现 出高对称性亚基结构特点 。电子显微镜和电泳技术揭示了多数哺乳动物铁蛋白蛋 白壳由H和 L类 型亚基组成，其中H亚基主要参与是负责铁的矿化和铁核晶体形成，而L亚基是提供酸性残基以促进 或加速铁的成核作用 5 。细菌铁蛋 白、SLF和 由基因克隆表达的铁蛋白均由单类型亚基组成。由单 类型亚基组成的铁蛋 白必须同时承担铁储存与释放的功能，类似于哺乳动物铁蛋白H和 L亚基的生理 功能，但其调控机理尚未清楚 ．9J。由于多数哺乳动物铁蛋 白的H(19kD )、L(21kDa)亚基和SLF、细 菌铁蛋白单类型亚基 (20kDa)的分子量很接近 ，使低分辨率的电泳技术难 以高效分离铁蛋白亚基类 型，从而得出同一种类的铁蛋白，不同亚基类型的实验结果。 目前，对不同来源于的铁蛋 白亚基组成、结 构与功能的论点仍有争论 。有关铁蛋 白亚基之间的协调作用与执行生理功能的研究并不多，其主 要原因在于缺乏研究铁蛋 白亚基及亚基外表层电荷分布规律的有效分析技术。如何选用与拓展高效分 析技术，并适合测定铁蛋白H和L亚基组成、分布与结构，对科学地阐明铁蛋白亚基的结构与功能至关 重要，但相关研究进展缓慢。有关海兔或其它软体动物肝脏铁蛋白的结构与功能研究尚未见详细报道。 海兔(却 )归属于腹足纲软体动物，它是开展分子神经生物学研究的经典模式之一l】。本实验 采用MALDI—TOFMS和电子光谱技术研究海兔肝铁蛋白(AIJF)解吸成亚基离子的能力和释放铁动力学 规律 ，其 目的是想了解在弱酸和弱碱介质中，激光和基质协同解吸由多亚基组成蛋 白质成为亚基离子的 可能性，铁蛋白释放铁的动力学规律以及这些规律与动物进化地位的联系，同时也为阐明低等动物肝脏 在进行铁代谢途径和机理提供科学依据 。 2 实验部分 2．1 仪器 、试剂与材料 提取铁蛋白所需要的肝脏均取材于活鲨鱼。分离介质二乙基氨基 乙基纤维素 (DEAE)-52购置于 2007-04—18收稿 ；20007-08-01接受 本文蚕甲享自然科学基金(No、福建省高校刨新团队培育计划、厦门大学预研基金(No．xdkic资助 且一main：hqhuangt~ x