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生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, February 25; 24(2): 250-255
journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061
cjb@im.ac.cn © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved
研究报告
RNA
GDF-8
1 2 1 2
刘超武 , 杨 倬 , 赵 斌 , 刘长梅
1 , 430070
2 , 100101
: 为将肌肉生长抑制素的干扰序列表达盒hU6-siGDF-8 有效导入肌成纤维细胞C2C12 中, 以pAV-hU6 + 27 载体
为基础构建逆转录病毒载体pXSN-hU6-siGDF-8, 并使之与pVSV-G质粒共转染GP-293 细胞, 用包装出的病毒粒子感
染宿主细胞C2C12, G418 筛选稳定整合逆转录病毒的抗性细胞库。2 周后, Western Blotting和Real-Time PCR分析结果显
示, 细胞内源性的GDF-8 基因的表达得到了有效的抑制; MTT法和细胞流式仪分析表明, G418 抗性细胞得到了更有效
的增殖, 并且G /G 期细胞数量减少了 13.7%, S期细胞数量增加了 14.9%。因此, 逆转录病毒载体的RNA干扰系统可以稳
0 1
定抑制 GDF-8 基因表达, 它将成为治疗肌肉萎缩疾病的一个强有力的工具。
关键词: 肌肉生长抑制素 GDF-8, C2C12 细胞系, 逆转录病毒, shRNA
Inhibiting GDF-8 Expression by Retrovirus-Based RNAi
Stably
1 2 1 2
Chaowu Liu , Zhuo Yang , Bin Zhao , and Changmei Liu
1 School of Life Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China
2 The Laboratory of Molecular Virus, Institute of Microbiology , Chinese Academy of Sciences, Beijing 100080, China
Abstract: We cloned human U6 promoter from pAVU6 + 27 vector into pXSN to transcripe small RNA. Meanwhile, a shRNA tar-
geting GDF-8 was cloned down-stream of the hU6 promoter to construct recombinant vector. Then the packing cell GP-293 was
co-transfected the recombinant with pVSV-G to gernarate virus particle. Res
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