毕赤酵母高密度发酵工艺研究.pdfVIP

中国生物工程杂志 　Ch ina B iotechno logy, 2009 , 29 ( 5) : 120 ～125 毕赤酵母高密度发酵工艺的研究 林俊涵 (福建生物工程职业技术学院　福州 　350002) 摘要 　高密度发酵是毕赤酵母提高蛋白表达量的一种重要策略 ,发酵工艺是高密度发酵的一个 重要因素 。采用下列措施均可以有效地提高表达水平 :调节基础培养基 ,采用变 pH 和变温发酵 , 提高 DO ,选择最适的诱导前菌体密度和比生长速率并降低甘油初始浓度和采用分段式指数流加 ( ) ( ) 进行调控 。选择合适的甲醇补料策略 : 甲醇限制补料 ML FB 、氧气限制补料 OL FB 、甲醇不限 ( ) ( ) 制补料 MNL FB 和温度限制补料 TL FB 。采用两种方式调控补料 :诱导阶段菌体生长时 , 甲醇 ( ) - 1 - 1 比消耗速率 q 为 0. 02 - 0. 03gg h ,而菌体不生长时 , q 采用较高值 。 M eOH M eOH 关键词 　毕赤酵母 　高密度发酵 　发酵工艺 中图分类号 　Q 815 ( ) 　　巴斯德毕赤酵母 P ich ia p as toris 是一种能高效表 同时补加 PTM 1微量盐溶液 。许多外源蛋白通过 B SM 达外源蛋白的表达系统 , 具有遗传稳定 、表达水平高 、 获得有效表达 ,但有些蛋白则效果不好 , 甚至不表达 , 蛋白可翻译后加工 、产物可分泌 、可高密度发酵等许多 因此 ,在表达不同蛋白时 ,需对 B SM 进行优化 。 优点 [ 1 ] ,应用十分广泛 , 已有数百种外源蛋白在该系统 1. 1　碳源的优化 中获得表达 。 　　甘油是菌体生长阶段普遍采用的碳源 ,通过补料 　　高密度发酵是基因工程菌提高外源蛋白表达水平 加入培养基 ,其浓度过低或过高会限制或抑制菌体生 的一种重要策略 ,迄今 , 已有许多蛋白通过高密度发酵 长 , 因此 ,需要优化初始甘油浓度 ,选择有效的补料方 获得高表达量 , 如巴西三叶胶腈水解酶的表达量高达 式 。葡萄糖也可作为碳源 , 虽效果不如甘油 ,但性价比 22 g/L [ 2 ] ,植酸酶表达量达 12. 2 g/L [ 3 ] , SAM 表达量达 却优于甘油 , 以葡萄糖代替甘油将有利于工业化生 [ 6 ] [4 ] β [ 5 ] 产 。 11. 63g/L , 1, 31, 4 D 葡聚糖酶表达量达 3g /L ( ) 　　甲醇是诱导表达阶段的碳源 ,其浓度 C 和补 等 。但是 ,不同外源蛋白的表达水平相差很大