转基因水稻Bt杀虫蛋白表达及对二化螟抗性.pdfVIP

摘 要 采用室内离体叶片测定法和活体成株生物测定法、酶联免疫检测(ELISA)、电镜观 察组织病理变化等技术方法，初步研究了转抗虫基因水稻对二化螟的抗虫作用。 在实验室内采用荸荠和茭白等半人工饲料替代水稻苗成功饲养二化螟种群，为课题 研究提供了虫源保障。 CrylAc／CpTI双价抗虫水稻(Oryzasativa)嚣部位中均得到了表达。不同水稻生育期 及不同部位Cr)，1Ac杀虫蛋白的表达量均有所不同。总的趋势是生育前期的表达量较生育 后期高。在时问上，主茎叶片中的杀虫蛋自在拔节期最高，孕穗期开始下降，在扬花期 和和灌浆期达到最低，到成熟期略有回升：主茎中的杀虫蛋白在苗期、拔节和扬花期较 高，种子中含量很低。采用离体叶片测定法对二化螟幼虫进行生物学测定。结果显示， 不同生育期转基因水稻主茎顶叶对二化螟初孵幼虫表现出了很强的抗虫性。在灌浆期 前，二化螟幼虫校正死亡率均在87％以上．尤其前期更高．在90％以上。灌浆期后抗虫性 有所下降，校正死亡率在60％左右。另外，活体成株测定法评价结粜表明，MSA和MSB对 二化螟表现高抗，接入二化螟幼虫后．均未出现任何枯心，而对照明恢86均有不同程度 桔心苗出现。室内生物测定结果和活体成株测定法结果基本一致。 采用离体叶片测定法比较了三种转不同抗虫基因水稻对二化螟的抗虫效果差异。结 其它转基因水稻品种。二化螟在取食后第4天，取食MSB各个时期的主茎顶叶的幼虫死 率分别是：44．681％、32．653％、63．265％、52．041％。 采用常规透射电镜制样方法对二化螟中肠组织进行观察。我们发现转基因水稻品种 MSB引起二化螟幼虫中肠组织的病理变化最为明显，取食MSB三天后的二化螟幼虫中肠组 织发生了十分明显的病理变化：微绒毛肿胀、捧列不整齐、变形、部分开始脱落：质膜 不明显、不完整：内质网卷曲、变少；部分线粒体内嵴不清晰、个数减少、双层膜不明 显、部分被破坏；核膜不磅显、细胞核变，l、；细胞内出现空泡。品种8BASI作用比较缓 慢，品种86AB2引起的变化最弱。 关键词转基因水稻；二化螟；Bt／CpTl杀虫蛋白：时空表达；抗虫效果；病理变化 ofBtInsecticidalCrrstalProteinsandTheir Expression to Resistance RiceChilo 0Naiker、 ofTransgenicsuppressalis ■■ ‘ ^DStraCt Intins ofBtinsecticidal paper,expression andtheirresistanteffectsof clystalproteins sativa stem h∞E呲rice(OryzaL)onstriped Walkenwere borer(Chilosuppressalis exploredbyELISA，Electronobservationand methods．Some microscope bioassay resuits as tmportantwe他obtainedfollow． Inordelto therice with replacingplantstheartificiaidietorsemi—artificiaJdJet to stemborerC aseriesresearchwere rinsing conducted．Itwasf