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几种无机盐对矿物吸附Bt毒蛋白的影响1 付庆灵，王婉琴，胡红青，陈守文 华中农业大学农业部亚热带农业资源与环境重点实验室，武汉（430070 ） E-mail ：hqhu@ 摘 要：以高岭石 (K) 、蒙脱石 (M) 、针铁矿 (G)和二氧化硅 (S)为材料，研究了不同浓度 KNO 、KH PO 和NH H PO 等 3 种无机盐溶液对矿物吸附Bt毒蛋白的影响，并探讨了无机 3 2 4 4 2 4 盐溶液与Bt毒蛋白不同加入顺序时，Bt毒蛋白在供试矿物表面的吸附特点。结果表明：低浓 度无机盐促进矿物对Bt毒素蛋白的吸附，而高浓度时起抑制作用；无机盐和Bt毒蛋白加入顺 序实验表明，同时加入蛋白和无机盐时影响最为明显；3 种无机盐对供试不同矿物吸附蛋白 的影响程度大小为：针铁矿 高岭石≥ 蒙脱石 二氧化硅；不同无机盐离子的影响程度 大小为：H - - + + 2PO4 NO3 ，NH4 K 。 关键词：Bt；毒蛋白；矿物；吸附；无机盐；加入顺序 1. 前言 苏云金芽胞杆菌 (Bacillus thuringiensis, 简称 Bt) ，近缘于蜡状芽胞杆菌，革兰氏染色阳 性，是一种产生伴孢晶体，能寄生于昆虫体内引起昆虫发病的芽胞杆菌，在其芽孢形成过程 中产生具有杀虫活性的杀虫晶体蛋白。自从Schnepf 等 (1981)首次成功地克隆了第一个编码 Bt 杀虫晶体蛋白基因，大量 Bt 基因的克隆，为利用转基因技术进行植物品种改良提供了 丰富和有效的抗虫基因资源，目前它在植物抗虫基因工程中应用最广泛。随着转基因技术的 发展和 Bt 杀虫制剂的广泛使用，大量 Bt 毒蛋白以多种方式进入土壤生态系统并在土壤中积 累 (Saxena et al, 2002 ；Donegan et al, 1996)，破坏土壤生物多样性，影响土壤的特异生物种 群、功能类群以及土壤生物多样性和土壤生态学过程，并最终威胁到整个土壤生态系统 (李 云河等，2005) ，且很多影响可能存在时滞效应 (王洪兴等，2002) 。 进入土壤的 Bt 毒蛋白可被粘土矿物 (蒙脱石和高岭石) 、腐殖酸和有机矿物聚合体等土 壤表面活性颗粒快速吸附，并与之紧密结合，但不会与粉粒和砂粒结合 (Tapp et al,1994 ； Crecchio et al, 1998, 2001 ；Venkateswerlu and Stotzky, 1992；Stotzky, 2000) 。75-85% 的纯化 Btt 和 Btk 可被腐殖酸快速吸附，吸附能力与其各种功能基的含量相关 (Crecchio et al, 1998)。 苏云金芽胞杆菌杀虫毒蛋白在矿物上的吸附非常迅速，1 小时即可达到最大吸附量的 70%， 8 小时内就可产生最大吸附。毒素蛋白被土壤胶体吸附后仍具有杀虫活性，毒性甚至比非结 合态的还强 (Tapp et al, 1994, 1995)，经红外光谱和 X 射线衍射分析，吸附后毒素蛋白仅有 微小的结构变化 (Stotzky, 2000) ，且具有良好的抗微生物降解性能，被吸附蛋白的杀虫活性 可持续存在 180 天或 234 天 (Saxena et al, 2002 ；Tapp and Stotzky, 1998 ) 。 2- - - - 土壤是一个复杂的生态系统，其中的无机盐离子如磷酸根、SO4 、NO3 、Cl 、HCO3 等 能影响土壤蛋白在矿物上的吸附 (Gianfreda et al, 1992)，继而影响土壤酶或蛋白的存在状态 及生物活性 (Rao et al, 2000) 。赵振华等 (2003)研究表明磷酸根抑制土壤胶体表面对酸性磷 酸酶的吸附，但目前关于无机盐影响Bt 毒素蛋白吸附的研究报道较少。 本文以土壤中常见的高岭石，蒙脱石，针铁矿和二氧化硅 4 种矿物为材料，研究了KNO3 ， KH PO 和NH H PO 等 3 种含养分元素的无机盐溶液对矿物表面Bt