三七病毒病害病原的初步鉴定.pdf

摘要 咀表现皱缩症状的三七叶片为研究对象，通过生物学、血清学、电镜观察及分子生物学方法 初步证明表现该种症状的三七中含有包括一种马铃薯Y病毒属病毒在内的至少3种不同病毒。 ToMV虽然也曾被检测到，但并不是主要的病原。 通过摩擦接种的方法将发病三七叶片的汁液接种于4科17种指示植物，结果所有供试植株 均不表现症状；将发病三七叶片与感染TMV的普通烟，感染ZYMV的小硒葫芦叶片分别磅磨后 按一定比例混合，接种指示植物，结果指示植物症状的严重度与发病三七叶片提取液浓度的商低 密切相关。因此，证明三七中含有抑制病毒侵染的物质。 ELISA分析结果表明，除第一次采集的样品与ToMV有血清学关系外，后两次采集的样品与 本实验宣保存的14属29种抗血清均没有血清学关系。 对第一次采集的样品提取总RNA，用特异性引物进行RT-PCR，得到了TOMv3，端部分序列。 转录，最终得到了病毒双链eDNA的随机片段库。随机挑选12个克隆测序，序列分析结果表明， 12个克隆中有3个克隆的序列与Potyvirus病毒有较高同源性，可以确定为该属病毒：另9个克 隆分别与水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged cerevisiaevirus L-A)、姬菇球形病毒(Oystermushroom括ometricvirus)有一定的同源性，可能为 其中的一种或几种，其分类地位有待于进一步研究确定。 提取发病三七叶片的总DNA然后用特异性引物进行扩增，没有检测到植原体的存在。提取 总RNA进行双向SDS．PAGE．没有检测到类病毒的存在。 mosaic 采用R1lPcR方法自扩增出小西葫芦黄花叶病毒(Zucchiniyellow virus．ZYMV)的CP 用IPTG进行诱导表达。SDS—PAGE和Western blot分析表明，CP基因在大肠杆菌中获得了高效 表达，融合蛋白分子量约为33．0 kD。将融合蛋白纯化后免疫兔子，获得了特异性较高的抗血清。 酶联法测定该抗血清效价为1／4096。 关键词：三七，皱缩病，dsRNA，双链cDNA，序列分析，ZYMV，原核表达 I Abstract wasshownthatthereweiga andatleasttwoothervirusesinthediseased It potyVims leavesof Panax biologyassay,serology,electron notoginsengshowingcrimplesymptomby microscopy andmolecular beendetectedELISA observation method．ToMVhadever andRT-PCR biology by itwasnotthemain analysis，but pathogen． Seventeenindicator to4 were inoculatedwiththeleaf plantsbelonginggenusesmechanically sap of allshowedno indicatorwereiⅡocIllatedwiththe diseased只notoginseng．andsymptom．Whenplants