亚低温对大鼠脑缺血／再灌注海马神经元AIF，MMP-9的影响成分.pdfVIP

医学信 息 2010年3月 第23卷 第3期 论著 亚低温对大 鼠脑缺血／再灌注海马神经元AIF， MMP一9的影响成分 陈胜 阳 张永强 张晓冉 【摘要】目的：通过动态观察亚低温对sD大鼠全脑缺血海马神经元AIF(凋亡诱导因子)、基质金属蛋白酶一9(MMP一9)的表达 的影响，探讨亚低温对脑保护的可能机制。方法：8—10周龄的成年雄性 sD大鼠，参照Pulsinelli的四血管阻断法制作全脑缺血模 型，随机分为假手术组，全脑缺血再灌损伤组，亚低温再灌注组，每组根据再灌注不同时间点(2h，ld，3d)制取海马标本，观察其组织 形态学变化；免疫组化检测AIF；酶联免疫吸附试验法测定基质金属蛋 白酶 一9(MMP一9)的含量。结果：假手术组各时间点无变 化，缺血再灌注两组海马神经元凋亡在 CA1区都从再灌注2h开始，且在 1d达到高峰后回落，其中亚低温组在 (1d、3d)明显降低了 AIF、MMP一9的活性，增加了存活细胞 (P0．05)。结论：亚低温可显著减少sD大鼠缺血性海马神经元再灌注后凋亡的发生，其 机制可能通过减少海马MMP一9的含量抑制中性粒细胞的活化，同时抑制AIF的表达而减轻神经元的炎性反应起到脑保护作用。 【关键词】亚低温；缺血／再灌注；海马；AIF；MMP一9 【中图分类号】R318．52 【文献标识码】A 【文章编号】1006—1959(2010)03—0011一O2 脑缺血再灌注可引起海马等缺血敏感区的神经元凋亡”， 2 结果 海马受损直接导致智力和记忆力下降。但迄今为止脑缺血再 2．1 海马各区锥体细胞的形态变化：SH组海马各区锥体 灌注损伤的发生机理尚未完全阐明，临床尚缺乏有效的保护策 细胞排列整齐，核膜边界清晰，核仁深染。I／R组细胞轮廓消 略和治疗手段。本实验采用亚低温干预大 鼠全脑缺血再灌注 失，大部分细胞胞浆固缩，核固缩、碎裂。HIR组的大部分细胞 损伤模型，TUNEL染色和荧光检测等方法，观察亚低温对AIF， 边界尚清，核形状 尚规则，核边界清，少数细胞出现核染色变 MMP一9表达的影响，探讨对缺血再灌海马区神经元凋亡可能 深，胞浆部分消失等变性的表现。 的保护机制。 2．2 免疫组化AIF的表达：SH组海马CA1有极少量AIF 1 材料和方法 蛋白表达 ，I／R组 AIF蛋 白在再灌注后 2h开始增多，至 1d、3d 1．1 材料 达高峰后开始下降，各时间点表达水平均有明显差异 (P 1．1．1 实验动物和材料：采用健康成年雄性 SD大鼠，体 0．05)。HIR组再灌注 1d、3d两时间点表达水平较 I／R组明显 重180g一220g，由新乡医学院实验动物中心提供。巴比妥钠 由 减少 (P0．05)。 上海国药集团提供。AIF，MMP一9抗体均购 自美国SantCruz公 2．3 酶联免疫吸附定量测定MMP一9：SH组海马CA1无MMP 司，二抗由北京中杉公司提供。 一 9蛋白表达，I／R组在再灌注后 1d开始增多，至3d达高峰后，各时 1．1．2 模型制作：参照Pulsinelli等 的四血管阻断法建 间回落，各点表达水平均有明显差异 (P0．05)。HIR组再灌注 立全脑缺血模型；实验过程中维持肛温在 (374-0．5)℃左右。 ld．3d两时间点表达水平较I／R组明显减少 (PO．05)。 亚低温组：缺血再灌注后 10min内鼓膜温度降至(33-40．5)oC 3 讨论 并维持2h。监测鼓膜温度 以反映脑温。整个实验过程将动物 1987年Busto等 发现了亚低温对缺血损伤的神经细胞有 置于流动空气浴箱中，用灯泡加热或冰块降温的方法维持动物 保护作用。亚低温能够抑制脑缺血神经元细胞的凋亡，促进脑 鼓膜温度在所需温度。 复苏