八氢番茄红素合成酶基因植物表达载体的构建及对人参的遗传转化.pdfVIP

维普资讯 第3O卷第4期 长春理工大学学报(自然科学版J VO1．30 No．4 2007盔 12)B JournalofChangchunUniversityofScienceandTechnology(NaturalScienceEdition Dec．2007 八氢番茄红素合成酶基因植物表达载体的 构建及对人参的遗传转化 何秀霞，张勇，于源华 (长春理工大学 生命科学技术学院，长春 I30022) 摘 要：将八氢番茄红素合成酶基因重组于植物双元表达栽体 pBin438，得到重组质粒 pBin438PSY．用冻融法将其 导入农杆菌EHA101中，采用叶盘法转4G,k．参愈伤组织，经诱导与筛选，获得 了潮霉素抗性植株。提取抗性植株总 DNA，通过PCR扩增和PCR—Southern杂交捡测，筛选出了整合有外源基因的抗性细胞系。为进一步研究八氢番茄 红素合成酶基因在人参中的表达及生物学功能的研究奠定了基础。 关键词：八氢番茄红素合成酶基因；人参；遗传转化 中图分类号：Q785 文献标识码：A 文章编号：1672—9870(2007)04—0069—03 ConstructionofPlantExpressionVectorwithPSY GeneandTransformationofGinseng HEXiuxia，ZHANG Yong，YU Yuanhua (CollegeofLfieScience．Changchun( 1，ersi0，ofscienceandtechnologyChangchun，130022) Abstract：TheplantexpressionvectorpBin438， carryingaPSY gene， wasconstructed．pBin438PSYwasintroducedin toAgrobacteriumtumefaciensbyrfozen—melting．GinsengcallusweretransformedviaAgrobactertumefaciensmediatedpro— cedure．TransgenicGinsengcalluscellsgrew ininductionmedium andplantsresistna ttOhygromycin wereobtained．The PCR andPCR—SouthernblottingnaalysisconfirmedthatPSYgenehadnitegratedintothegenomeoftobacco． Keywords：PSY ；Ginseng；transfomr ation 八氢番茄红素合成酶基因 (PSY)催化栊儿基 用价值而且提高了类胡萝 卜素含量，使人参的营养 拢牛儿基焦磷酸 (GGPP)转化成八氢番茄红素， 价值也得到提高 ]。本研究将八氢番茄红素合成酶 PSY 是类胡萝 卜素生物合成途径中的第一个关键 基因重组到含有强组成型启动子DE35S的植物双元 酶，其基 冈在 1987年 Ray等从番茄中获得，1992 表达载体pBin438中，通过农杆菌介导转入人参， 年Bralnley证实了该基因 。除番茄外，现还从辣 为进一步研究八氢番茄红素合成酶基因在人参中的 椒、拟南芥、玉米、黄水仙 、甜瓜和 白芥等植物分 表达及生物学功能奠定了基础。 离出PsY基冈。PsYcDNA长 1_3～1．6kb，编码 409～423个氨基酸 ，基因全长 3．2～6．0kb 1 材料与方法 人参是我国传统的名贵药材，是应用最广泛 ，