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必需氨基酸（一笨蛋来宿舍歇凉）/半必需氨基酸---精氨酸、组氨酸 茚三酮反应 试剂：(DNS-Cl，Dansyl chloride)二甲氨基萘磺酰氯；丹磺酰氯 Sanger反应 试剂：2,4-二硝基氟苯（FDNB/DNFB）产物为黄色的DNP-AA Edman反应 试剂：苯异硫氰酸苯酯（PITC） 生成苯乙内酰硫脲--PTH-AA D-\L-AA 紫外吸收（280nm 色酪苯） 蛋白质的平均含氮量为16%，所以蛋白质含量=蛋白氮*6.25（凯式定氮） 蛋白质的化学结构/共价结构包括肽链数目、端基组成、氨基酸序列和二硫键的位置。 一级结构:指多肽链的氨基酸序列。 8、构型(configuration)是指一个分子由于其中各原子特有的固定的空间排列，而使该分子所具有的特定的立体化学形式。 构象(conformation) 在立体异构体中，取代基团当单键旋转时可能形成的不同的立体结构。 维持三维结构的主要作用力：氢键、范德华力、疏水作用、盐桥、二硫键 蛋白质结构层次：一级结构、二级结构、超二级结构、结构域、三级结构、四级结构 寡肽：含有几个至十几个氨基酸残基的肽成为寡肽 四级结构的蛋白质中每个球状蛋白质称为亚基，亚基一般是一条多肽链 对称性是四级结构蛋白质的重要性质之一 Motif--超二级结构 结构域--domain 蛋白质二硫键异构酶 PDI 肽基脯氨酰顺反异构酶PPI 别构效应（allosteric site）：蛋白质与配基结合改变蛋白质的构象，进而改变蛋白质的生物活性的现象。 镰刀型贫血病：血红蛋白β亚基N端的第6号氨基酸残基发生了变异Glu变为Val BPG—2,3-二磷酸甘油酸 ELISA---酶连免疫吸附测定 蛋白质结构与功能的关系： 蛋白质的结构决定功能，功能是其结构的体现 1.一级结构与功能的关系 蛋白质中的氨基酸序列与生物功能密切相关，一级结构的变化往往导致蛋白质生物功能的变化。如镰刀型细胞贫血症，其病因是血红蛋白基因中的一个核苷酸的突变导致该蛋白分子中β-链第6位谷氨酸被缬氨酸取代。这个一级结构上的细微差别使患者的血红蛋白分子容易发生凝聚，导致红细胞变成镰刀状，容易破裂引起贫血，即血红蛋白的功能发生了变化。 2高级结构与功能的关系 血红蛋白是一个四聚体蛋白质，具有氧合功能，可在血液中运输氧。研究发现，脱氧血红蛋白与氧的亲和力很低，不易与氧结合。一旦血红蛋白分子中的一个亚基与O2结合，就会引起该亚基构象发生改变，并引起其它三个亚基的构象相继发生变化，使它们易于和氧结合，说明变化后的构象最适合与氧结合。葡萄糖+2Pi+2ADP+2NAD+ 2丙酮酸+2ATP+2NADH+2H+ +2H2O 有氧时，2NADH进入线粒体经呼吸链氧化又可产生6分子ATP,再加上由底物水平的磷酸化形成的2个ATP，故共可产生2+6=8分子ATP。 无氧时，2NADH还原丙酮酸，生成2分子乳酸或乙醇，故净产生2分子ATP。 无氧条件下，丙酮酸可转变为乳酸，也可生成乙醇 有氧条件下，丙酮酸氧化脱羧生成乙酰-CoA，进入三羧酸循环，氧化供能 焦磷酸硫胺素(TPP) 在一个代谢过程中往往催化不可逆反应的酶限制代谢反应速度，这种酶称为限速酶 糖酵解途径中己糖激酶(HK)，磷酸果糖激酶-1(PFK-1)和丙酮酸激酶(PK)是主要的限速酶。 ★磷酸果糖激酶： 三个限速酶中起决定作用的是催化效率最低的酶PFK。因此它是一个限速酶，酵解速度主要决定于其活性。 6-磷酸果糖、ADP和AMP等是磷酸果糖激酶的别构激活剂，而ATP等是该酶的别构抑制剂。ATP既是该酶作用的底物，又起抑制作用 在PH明显下降时糖酵解速率降低 己糖激酶： 己糖激酶的别构抑制剂为其产物6-磷酸葡萄糖。当磷酸果糖激酶活性被抑制时，底物6-磷酸果糖积累，进而使6-磷酸葡萄糖的浓度升高，从而引起己糖激酶活性下降。 丙酮酸激酶 丙酮酸激酶具有变构酶性质，高浓度ATP、丙氨酸、乙酰CoA等代谢物抑制其活性，这是生成物对反应本身的反馈抑制。当ATP的生成量超过细胞自身需要时，通过丙酮酸激酶的别构抑制使糖酵解速度减低。cAMP激活的蛋白激酶也可使丙酮酸激酶磷酸化而失活。ADP是变构激活剂，Mg2+或K+可激活丙酮酸激酶的活性。 糖酵解的意义 （1）糖酵解是存在一切生物体内糖分解代谢的普遍途径。 （2）通过糖酵解使葡萄糖降解生成ATP，为生命活动提供部分能量，尤其对厌氧生物是获得能量的主要方式。 （3）糖酵解途径的许多中间产物可作为合成其他物质的原料（提供碳骨架）。 （4）是糖有氧分解的准备阶段。 （5）由非糖物质转变为糖的异生途径基本为之逆过程。 81、三羧酸循环 (TCA)丙酮酸有氧条件下在线粒体基质中被氧化分解为CO2，整个