色谱分析-HPLC.docxVIP

快速高压液相色谱法分析木质生物质水解和发酵产品的发展和验证Christopher J. Scarlata?, Deborah A. Hyman摘要：现在，用比较精确的十分钟HPLC（高压液相色谱）法来分析处理生物质成为可再生燃料的过程中产生的有机酸、醇、呋喃的方法得到了发展和验证。这种方法使用H+阳离子交换树脂作为固定相，传统的液相色谱法的分析时间是这种HPLC的分析时间的六倍。这种新方法通常用来分析乙酸、乙醇、5-羟甲基糠醛和糠醛。同样分析相同的化合物，传统的HPLC的分析时间有55分钟，而本实验中用到的HPLC的分析时间只有不到十分钟。在HPLC中使用示差折光检测器，所有化合物在一定范围内均呈现良好的线性关系，相关系数r20.999，LOD（检测限）的范围为0.003~0.03g/L，LOQ（定量限）的范围为0.1~0.01g/L，RSD（相对标准偏差）0.4%，回收率为92%~114%。 关键词：生物质；可再生能源；阳离子交换高效液相色谱法；乙酸；乙醇；糠醛；快酸的方法简介石油的高消耗使得可再生燃料和化学物质再次成为关注的热点。美国能源部制定了一套每年大约生产600亿加仑的可再生燃料的方案，这些燃料便可成为美国国内的主要燃料[1]。新的、更高的生产量的解决方法能够加快研究的步伐，以便更快的实现日程表上的目标。研究人员经常使用高效液相色谱法分析生物质能水解产生的液体或经发酵作用的产物或用酶处理过的样品中的乙醇、有机酸和呋喃[2]。这种方法经常用来控制发酵作用时预处理生物质水解产物过程中或者进行同步糖化与发酵作用时的酒精产率，还可用此方法测量预处理过程中产生的乙酸和呋喃[3、4]。用基于阳离子交换树脂高效液相色谱的“一体化”的方法能够便利地研究有机酸、乙醇、呋喃。这种树脂是通用型的，Pecina等人[5]发表的论文就是用H +阳离子交换树脂(Aminex HPX-87H,BioRad)来研究63种化合物的行为。另外，这种方法的条件比较简单，实验很容易就能完成。用稀硫酸作等度流动相，示差折光检测器来检测化合物。在色谱法中酸性的流动相能不断地再生固定相[6]。（在HPLC中，如果使用示差折光检测器，不能使用梯度洗脱，因为随溶剂组成的改变，流动相的折射率也在改变，就无法使基线稳定）虽然，用BioRad Aminex HPX-87H分析柱能达到这些目的[4,7-14]，但由于呋喃会强烈的吸附在柱壁上便使得分析时间一般比较长。本文研究的目的是比较Aminex分析柱（系列糖分析柱）和能少用五倍分析时间的Rezex RFQ分析柱(Phenomenex菲罗门)的性能。Rezex分析柱跟Aminex分析柱一样使用H+阳离子交换树脂，徐等人[15]用Rezex分析柱来快速分析静脉注输液中的葡萄糖和羟甲基糠醛。化合物与分析柱之间有多种相互作用，包括离子交换、离子排斥、大小排斥、配位体交换、离子减少分区和与聚合的支持基质之间的相互作用[16-19]。温度和流速对分析时间的影响很大。当分析柱在高柱温下运行时，呋喃的保留时间可以大大地减少[5]。Phenomenex（菲罗门）分析柱相对于Aminex分析柱能承受更高的温度和流速，所以能大大缩短分析时间。2.实验2.1.试剂和标准样超纯水，18.2兆欧(Barnstead，NanoPure Diamond，迪比克市，IA，美国)，10N硫酸（马林克罗特制药公司，黑泽尔伍德，MO，美国）。高效液相色谱校准用基准购自Absolute Standards,Inc.(Hamden,CT,USA)这些基准包括纤维二糖、葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、木糖醇、乳酸、甘油、乙酸、乙醇、5-羟甲基糠醛(HMF)和糠醛的4种不同的浓度（表1中所列出的浓度范围内）。浓度验证标准(CVS)也是购自Absolute Standards,Inc.其中包含相同的化合物从独立很多最终中点附近的浓度的标准。（最后一句需该）2.2.样品本实验用到的半纤维素水解物是在2003年的秋天从科罗拉多州的东北部的一个农场中收获的磨玉米秸秆中获得的。稀硫酸处理秸秆，用小工业规模连续反应堆每天处理900公斤干燥的秸秆。操作的固体浓度30%(w / w)，温度190℃，每克秸秆用酸0.048 g，滞留时间大约1分钟。一份预处理过的研磨液用来做同步糖化和深层发酵的实验。 半纤维素水解产物是在2000帕斯卡的压力下通过液压机固液分离得到的，预处理过的研磨液含有大约70%的酒。2.3.仪器本实验中使用的高效液相色谱仪器是安捷伦科技公司1100系列(Santa Clara,CA,USA)配备内联脱气装置，等度泵，自动进样器，温度调节装置（调节样品的温度为5℃）和示差折光检测器。该仪器的运行由电脑上的安捷伦化学工作站软件控制。实验中用0.01N（0.01mol/L）的