重要多糖分离纯化方法及应用实例.pdfVIP

    2009‐8  volume30      多糖分离纯化方法及应用实例      多糖的应用现状       近 20 年来,随着天然药物化学、药理研究的不断深入即分析手段突飞猛进的发展,多糖 的研究引起了国内外许多学者极大的兴趣。研究表明,  多糖具有复杂的多方面的生物活性 和功能,特别是对机体免疫功能的作用。现在多糖已成为天然药物及保健品研发中的重要组 成部分。      作为药物的多糖在治疗肿瘤时,不像一般化疗药物直接杀死生长着的肿瘤细胞,而是促 进细胞和体液免疫反应,如激活补体、巨噬细胞、T 淋巴细胞、B 淋巴细胞或加强抗体生成 等, 以达到抑制和消灭肿瘤细胞的作用,对正常细胞影响很小。      例如：紫草和枸杞多糖具有抗突变、抗衰老和增强免疫功能的作用;枸杞多糖等可抵抗 自由基过氧化；香菇、商陆、松果、柴胡和云芝多糖可激活巨噬细胞,从而抑制肿瘤生长; 从三七、防风、甘草和刺五加中提取的多糖类化合物能激活网状内皮系统,发挥抗肿瘤作用; 灵芝多糖通过活化巨噬细胞和蛋白激酶 C (PKC)而发挥免疫增强作用等。目前, 已有部分天 然多糖类化合物用于临床,显示出良好的疗效,多糖在治疗肿瘤、代谢及感染性疾病等方面 的应用仍在不断扩大,给近代肿瘤、艾滋病及其他疾病的治疗开辟了新的方向。       因此，许多学者也纷纷开始研究多糖，而多糖的分离纯化也成为了研究多糖不可或缺 的步骤。选择合适的分离纯化多糖填料尤为重要。    多糖的分离方法                                                               尽管多糖来源不同、品种繁多，但其分离纯化的方法基本类似，主要是利用多糖溶于水 或酸、碱、盐溶液，而不溶于醇、醚、丙酮等有机溶剂的特点。提取时，一般应先将植物原 料脱脂和脱色素，然后以水为主体溶剂（如冷、热税或烯的酸、碱溶液）提取多糖。提取液 以醇、丙酮等沉淀析出，所获得的粗多糖需经反复溶解与醇析。对于含糖多的苷类也可采用 此法得到总苷。        2009‐8  volume30        糖类提取之后需要进一步除去大量的非糖杂质，再进行混合糖类的相互分离，这是一项 比较困难的工作，尤其是多糖类难以获得纯品。一般可采用下列方法分离纯化混合多糖。其 中柱层析法是目前采用比较多的方法。    部分沉淀法    金属盐沉淀法  提取液中加入中性醋酸铅可沉淀去除大部分酸性、酚性的杂质 （如有机酸、氨基酸、蛋白质、 树脂酸、黄酮、蒽醌、鞣质等），包括酸性多糖。而用碱式醋酸铅对多糖的沉淀就更为完全。 除去杂质后的母液用H2S脱盐后，单糖、低聚糖和水溶性较大的中性苷类仍保留在滤液中。 铅盐沉淀法除去杂质比较完全，母液脱铅后可用于单糖和低聚糖的定量，也可用铜盐沉淀法 提取多糖。  季铵盐沉淀法  季铵类氢氧化物是一类乳化剂，可与酸性糖形成不溶性沉淀，常用于分离酸性多糖。季铵氢 氧化物与中性多糖不生成沉淀，但当调高PH，使某些OH基解离，或加硼酸缓冲液增高糖的 酸度，中性糖也能被沉淀。利用季铵氢氧化物在酸性、中性、微碱性、碱性中分级沉淀可以 分离多糖。  甲醇分级沉淀法  常用的分级沉淀法是在混合多糖的浓水溶液中（常在PH=7时），逐步加入乙醇，收集不同醇 浓度下析出的沉淀。一般各次沉淀需经反复溶解后，再醇析，直到测得的物理常数恒定，最 常用的是旋光度测定和电泳检查。用分级沉淀法得到的多糖，常杂有较多的蛋白质，必须予 以去除。一般选择那些使蛋白质沉淀而使多糖不沉淀的试剂来处理，如酚、三氯乙酸、鞣酸 等。但必须处理时间短，温度低，避免多糖降解。    透析、超滤及超速离心       选用不同规格的超滤膜和透析带进行超滤和透析, 以及一定条件下的超速离心操作,可按分子 大小差异把多糖样品分级。超滤和透析更常用于除去小分子物质。        2009‐8  volume30    制备性区域电泳    在电场作用下，不同的多糖按其分子大小、形状及其所带电荷的不同而达到分离。载体通常 是玻璃粉。电泳完毕后，将玻璃粉载体推出柱外，分割后分别洗脱。此法分离效果较好，但 只适于实验室小规模应用。常用的有聚丙烯酰胺凝胶电泳、醋酸纤维塑膜电泳。    柱层