AFLP法在辣椒胞质雄性不育恢复系选育中的应用.pdfVIP

维普资讯 中山大学研究生学刊 (自然科学、医学版) 第26卷第 1期 JOURNALOFTHEGRADUATES VOL．26No1 2005 SUNYAT—sENIN『IⅦRSrIY (NA1’瑕【AI．SCIENCES、MEDICINE) 2005 AFLP法在辣椒胞质雄性不育恢复系 选育中的应用 尹晗琪 刘荣云 欧阳学智 (1，3中山大学基因工程教育部重点实验室，广州510275 2湖南湘研种业责任有限公司，长沙410125) 摘 要 辣椒具有显著的杂种优势，利用细胞质雄性不育 (CMS)三系制种 是辣椒杂种优势利用的重要途径。为了丰富辣椒CMS的基础理论，加快辣椒 CMS恢复系的选育步伐，本研究以湖南省蔬菜研究所选育的辣椒 CMS系 9704A、恢复系8001及其组合9704A×8001F2群体24株植株为材料，利用 AFLP法和群分法 (BSA)进行恢复基因定位，找到一个与辣椒 CMS恢复系 8001中的恢复基因紧密连锁的分子标记OPL09一。加。 关键词 辣椒 BSA法 AFLP分子标记 SCAR标记 恢复基因 辣椒 (Capsicum~ZlT,17,1,tlUYtL．)胞质不育为核质互作，对其遗传机制进行研究，发现在 花药内有可育花粉视为雄性可育的前提下，其遗传方式符合单基因的遗传规律；但可育 个体问可育度的差异是连续变化的，除受主效基因影响外，育性的恢复程度还受修饰基 因的影响，表现为数量遗传，不同供试材料对育性的恢复程度有很大差异。辣椒胞质不 育 (CMS)恢复基因多分布于辣椒 (Hotpepper)中，而在甜椒 (Sweetpepper)品系中则 非常少见，这限制了胞质雄性不育利用的自由度。因此，应用基因工程手段确定辣椒恢 复基因并进行转导，对于辣椒恢复系的选育十分必要 J。AFLP法具有检测DNA多态性 丰富的特点，利用AFLP法选出特异性的引物，目的是为辣椒胞质雄性不育恢复系的选 育提供有用的信息。 1 材料和方法 1．1试验材料 本研究对来自同地区的辣椒细胞质雄性不育系9704A (12株)及其恢复系8001(12 株)，用AFLP的方法进行分子标记。 1．2 试验方法 收稿日期：2005—03—06 维普资讯 AFLP法在辣椒胞质雄性不育恢复系选育中的应用 1．2．1 雄性育性观察和分类 植株开花后于2003年5月至7月进行育性调查，每个单株至少调查3次，每次至少 调查5朵话或5个果。分类标准参照邹学校的方法[4]，即不育株与可育株的花器特征明 显不同，不育株花器较小，花丝变短，花药瘦小干瘪，不开裂或部分开裂，无花粉或仅 有极少数花粉，花柱较长，不结实或结实很少，即使结实，果实种无种子或种子很少。 1．2．2 DNA的提取 辣椒总基因组DNA的提取参照的鼎国自产DNA提取试剂盒的方法，并略作修改。 1．2．3 DNA纯度和浓度鉴定 利用WFZ800一D3A型紫外可见分光光度计，分别在波长260rim和28Onot处测定上 述所提取的辣椒基因组DNA的OD值，OD260O／D280比值在1．8左右的DNA样品及样品 浓度，再用 1％琼脂糖凝胶电泳检测并估计DNA分子的大小及一致性。 1．2．4 DNA浓度测定 取已知50ng／浓度的对照模板DNA (鼎国公司提供)4 ，再取4 辣椒基因组 DNA样品，同时用 1％琼脂糖凝胶 (含EB)电泳20分钟，用凝胶成像系统进行照相， 比较DNA带的亮度，确定浓度。根据浓度分析结果，用灭菌去离子水将所有样品DNA 浓度稀释成50ng／kd。 1．2．5 雄性不育DNA池 (ms．bulk)和可育DNA池 (Pd-bulk)的构建 从9704A×8001F2分离群体中，根据育性调查结果，随机取典型的12个雄性不育 单株和 1O个雄性可育单株的DNA样品，等量混合组成雄性不育DNA池 (ms—bull)【和 可育DNA池 (Rf—bulk)。 1．2．6 AFLP分析