解决YMC色谱反相条件下压力过高方法.pptVIP

解决YMC色谱反相条件下  压力过高的方法 一、背景 1.时代背景 高效液相色谱法是近30年发展的一种色谱分析法，以其专属性高，分析效能高，检测灵敏高，分析速度快等特点，越来越多的应用于化学分析方法中。以中国药典2005版二部为例，采用高效液相法的品种达到848种。而且药品的含量检测、杂质、鉴定方法，由传统的检测方法逐渐过渡到高效液相法。可见高效液相色谱法逐渐成为常规的分析方法。 2.色谱柱的结构 我们还有必要了解色谱柱的结构，一套完整的色谱柱，即高效液相色谱柱系统，除填有填料的柱管外，还应有柱头及配套的连接管。柱头内有垫圈和过滤片。YMC的色谱柱的垫圈和过滤片是一体化的。过滤片的孔径为1μm。（见插图1） 插图1 色谱柱的结构 3.清洗柱子的时间 查阅相关资料通常所说的冲洗柱体积多少倍，我们以250mm×4.6mm常规柱为例，由下列公式V=πR2×h=3.14×（4.6/2）2×250÷ 1000=4.2ml 知需4.2ml左右溶液，才能冲洗1次。通常我们所洗10倍体积，即42ml体积，如果我们以1ml/mim冲洗，则需要42分钟就可以完成清洗任务。 二、色谱柱的分类及特点 1.色谱柱的分类 2. YMC色谱柱的相关技术参数： 三、YMC柱的缺点 虽然YMC色谱柱具有上述的优良性质，但是在新柱使用几个月后，压力逐渐上升，以致于达到250bar左右的压力。过高的压力会造成色谱仪泵内的密封圈漏液，连接管路中漏液，加快了易耗件的消耗，增加了高效液相色谱仪的运行成本。而且随工作压力的逐渐上升，最后超过泵所承受的最高压力，使泵不能工作。虽然YMC色谱柱有1万多理论塔板数，但因色谱柱高压无法使用，所以我们必须解决色谱柱的高压问题。 四、分析原因 YMC色谱柱产生过高压力的原因：主要是流动相和样品溶液带来的有机物和无机物的污染。 五、解决有机物污染的方法 1.有机物污染的原因： 1.）曾经使用正相条件后，再进行反相条件。 2.）样品中有不明的有机物。 2.有机物污染的解决办法 需要注意的问题 特别要指出的是，有的色谱仪中单向阀的宝石球，在100%乙腈水溶液中易发生粘连，例如岛津10ATV泵。所以你在不了解色谱仪中的宝石球的组成时，切不要用100%乙腈冲洗，以免造成宝石球粘连，泵不出液体的情况来。 1.无机物污染产生的原因： 当流动相和样品进入色谱柱后，盐类、脂类、含脂物质，可能在使用时与色谱柱发生相互作用，当被吸附的样品成分积累到一定程度时足以使它们形成新的固定相，分析物能与这些杂质作用形成一定的时间波动，如果足够的污染产生，柱子会逐渐产生高压。 2.解决无机物污染的办法 3.1清洗柱子 我们先用10%甲醇水溶液冲洗45分钟。使柱压降至140-150bar左右。 然后用0.05mol/L硫酸水溶液冲洗45分钟。 再用10%甲醇溶液冲洗45分钟。 最后用色谱甲醇冲洗45分钟。使柱压降至80bar左右。 注意事项 提醒大家注意的是配制甲醇水溶液所使用的蒸馏水，必须使用0.2um过滤的。通过多次实验，我们将用水锁定在冻干岗位。因为注射用水的过滤孔径是0.45um，而冻干岗位的用水过滤孔径0.2um，符合色谱仪的使用要求。如果没有以上用水条件，建议对蒸馏水蒸馏3遍后再使用。否则，水中的金属离子必将引起柱效下降。YMC色谱柱承受pH值范围在2~7之间，过低的pH会造成柱中的硅胶溶解，使柱效下降。而0.05mol/L硫酸pH =2.2左右，符合YMC色谱柱pH值范围，而且0.05mol/L硫酸能够溶解硅胶吸附的杂质，并将其冲洗出来。 3.2清洗过滤片 如果上述方法仍不能解决色谱柱的高压问题，这说明筛板堵塞。取下柱头，用10%硝酸将其超声40分钟，用清水洗净，然后用蒸馏水再次超声40分钟，反复两次，清洗完毕后，将柱头安装好。在拆卸、安装的过程中，最好使用板牙或扳手拧柱头，切忌使用过长、过大的扳手或板牙，或使用过大的力气致使柱头滑丝，或拉坏柱头内的筛板。安装好清洗干净的柱头后，用甲醇冲洗色谱柱45分钟。 3.3试漏 用0.5ml/min的流速逐渐升至2.5ml/min，使柱压达到200bar左右，然后用滤纸沿着柱头连接处，查看有无液体漏出。如果有，先停泵，不可强力拧紧柱头，而是将柱头卸下，然后对准丝口，重新上好，再行试漏。 无机物污染的解决办法 七、预防措施 为了避免YMC柱压升高后烦琐的清洗过程，我们平时使用色谱仪器时需要注意以下几点： 使用的流动相需要0.45μM滤膜进行过滤，超声。目的：滤去孔径叫大的杂质，并脱气。 七、预防措施 2. 在反相条件下，由于大部分是使用