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链霉菌来源的UDP_葡萄糖_4_差向异构酶基因的克隆表达及酶性质研究.pdf
卷 期
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年 月
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链霉菌来源的 葡萄糖 差向异构酶基因的克隆表达及酶性质研究
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张天宇 王玲燕 姜 蓉 李 元
（中国医学科学院 中国协和医科大学 医药生物技术研究所 北京 %%%% ）
摘 要：经同源性比较，链霉菌 （ ）产生胞外多糖依博素的生物合成基因簇中 基因编码的
35 !#$%’()$* GD * 35 *$ 5
蛋白 与 葡萄糖 差向异构酶有较高同源性。将 基因克隆至质粒 ，在大肠杆菌 （ ）中
H@,5 I+J7 7!7 *$ 5 D863%9 KL$ +83
进行了异源表达。产生的可溶性 重组蛋白，占细胞总蛋白的 ，说明该基因高 含量（ ）及第三位
H@,5 $# M NO A3 F2M
碱基偏向使用 （ ）并未影响其高效表达。 结果显示重组蛋白的分子量约 ，与理论推测值基
NO 5# F$ M H+H7J4N8 3AP+
本相同。经亲和层析纯化后得到了较高纯度的重组蛋白，经 分析纯度为 。酶活性分析表明： 蛋
QJLO 5$ F5 M H@,5
白可将 葡萄糖转化为 半乳糖，因此， 蛋白是 葡萄糖 差向异构酶，它可能参与了依博素的生物
I+J7 I+J7 H@,5 I+J7 7!7
合成。
关键词：链霉菌，差向异构酶，表达，依博素生物合成
中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ）
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细菌胞外多糖的生物合成基因成簇存在，其中 由陈松森教授惠赠。
某些基因在胞外多糖的生物合成前体核苷酸糖的合 试剂： 凝胶抽提试剂盒和
’ ’( +14 0.1 D)G +14
成起着重要的作用。链霉菌 （ 聚合酶购自上海H9=U(= 公司。所有限制性内切酶、
35 !#$% ’()$* GD *
）能够产生胞外多糖依博素，该糖在体内具有明 分子量标准、 、 和
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