双水相萃取应用课件.pptxVIP

双水相萃取的应用two aqueous phase extraction ;;前言;双水相萃取 双水相系统：因两种水溶性聚合物水溶液或一种水溶性聚合物的水溶液与盐溶液混合时的不相容性而形成有明显界面的两相系统。 特点：因使用的溶剂是水，因此称为双水相，在这两相中水分都占很大比例(85％~95％)，活性蛋白或细胞在这种环境中不会失活，但可以不同比例分配于两相，这就克服了有机溶剂萃取中蛋白容易失活和强亲水性蛋白难溶于有机溶剂的缺点。;发展历史;发展历史;萃取原理 ; 生物分子的分配系数取决于溶质与双水相系统间的各种相互作用，其中主要有静电作用、疏水作用和生物亲和作用等。因此，分配系数是各种相互作用的和:;可形成双水相的双聚合物体系很多，如聚乙醇(PEG)/葡聚糖(Dx)，聚丙二醇/ 聚乙二醇和甲基纤维素/葡聚糖等。双水相萃取中常采用的双聚合物系统为PEG/Dx，该双水相的上相富含PEG，下相富含Dx。 除双聚合物系统外，聚合物与无机盐的混合溶液也可形成双水相，例如，PEG/磷酸钾(KPi)、PEG/磷酸铵、PEG/硫酸钠等常用于生物产物的双水相萃取。PEG/无机盐系统的上相富含PEG，下相富含无机盐。;各种类型的双水相体系;常用的双水相体系是聚乙二醇(PEG)/葡聚糖(Dx) 体系和PEG/磷酸盐体系。PEG/Dx体系一般用于小规模地分离生物大分子、膜、细胞等，PEG/无机盐体系主要用来大规模地提纯酶，这是因为PEG/无机盐体系的萃取专一性更高，葡聚糖价格昂贵的缘故。 物质在两相中的选择性分配是疏水键、氢键和离子键等相互作用的结果，可溶性物质的分配情况可由分配系数K来表征，细胞这些更大颗粒的分配情况则由分配比P来表征。影响蛋白质及细胞碎片在双水相体系中分配行为的主要参数有成相聚合物的种类、成相聚合物的分子质量和总浓度、无机盐的种类和浓度、pH值、温度等。;双水相萃取的基本特点;(2) 与常用的亲和层析相比，双水相萃取能够在较少的溶液量和较短的操作时间内获得较高产量的产品。另外，操作能够容易、精确地按比例放大，非常适合大规模应用，可进行连续生产。而亲和层析由于操作难于放大，应用受到限制。 (3) 聚合物的浓度和分子质量、无机盐的种类和浓度、pH 以及温度等均能影响被分配物质在两相间的分配，所以操作容易进行控制，进而达到目的产物的最佳萃取条件。 (4) 可与细胞破碎相结合，即细胞悬浮液中加入PEG和无机盐后再通入珠磨机进行破碎，然后用离心机分相。既节省了萃取设备和时间，又避免了胞内酶的损失。;(5) 能进行萃取性的生物转化。在一些双水相体系中可将发酵生产过程中的生物转化与下游处理的第1步相结合，即生物反应在其中一相中进行，同时生成的反应产物被连续萃取到另一相中。不仅解决了产物反馈抑制作用造成的产量低的问题，而且酶在高聚物溶液中比在缓冲液中更稳定，活性更大。因为生物反应和生物产物的提取同时进行，尤其适于连续生产。;(6) 亲和萃取(亲和分配) 可大大提高分配系数和萃取专一性。由于目标蛋白质与其他杂蛋白的理化性质相近，造成其萃取专一性不高。亲和萃取就是将一种和目标蛋白质有很强亲和力的配基与一种成相聚合物共价结合，该成相聚合物与另一种成相聚合物形成双水相体系进行萃取时，目标蛋白质专一性地进入结合有配基的那种成相聚合物所在相中，其它杂蛋白则进入另一相。此技术已用于乙醇脱氢酶、丙酮酸激酶和核酸内切酶等酶以及细胞、细胞器、膜等粒子的提取。;双水相萃取的优点;缺点和不足;四、双水相萃取技术在生物、食品工业中的应用;(2) 进行萃取性生物转化。应用实例有：利用葡萄糖和淀粉生产乙醇、利用葡萄糖生产丙酮丁醇、利用淀粉和纤维素水解生产葡萄糖、水解酪蛋白、发酵生产乳酸、将青霉素G转化为6-氨基青霉烷酸等。 (3) 食品工业中用来从酸水解产物中提取二肽、氨基酸、核苷酸等风味物质。在生物技术方面，可用来提取DNA。 (4) 萃取细胞、细胞器、膜等粒子。大多数都是用亲和萃取方法来达到目的的。 (5) 应用于液- 液分配层析(LLPC)。将一种聚合物连接在固体颗粒(支持物) 上，另一种聚合物的溶液作为流动相，这种柱层析技术可分离蛋白质、核酸以及细胞混合物。;(6)中草药中有效成分的提取：近年来有关双水相提取天然药物中有效成分的报道逐年增多。以乙醇-磷酸氮二钾-水双水相体系萃取甘草有效成分，在最佳条件下，分配系数 (K)达12.8， 收率(Y)高达98.3%。用双水相萃取体系富集分离银杏叶浸取液的研究，也有良好的分配系数和分离效果。 (7)双水相在金属离子分离中的应用：传统的金属离子溶剂萃取方法存在着溶剂污染环境、对人体有害、运行成本高、工艺复杂等缺点。近年来，利用双水相技术萃取分离金属离子达到了较高的水平。;新型双水相系统的开发： 在生物物质分离过