拟南芥ICEr2元件反式作用因子基因克隆与分析.pdfVIP

拟南芥ICEr2 元件反式作用因子基因的克隆与分析1 王琪，朱延明，王冬冬 东北农业大学生命科学学院，哈尔滨（150030 ） E-mail ：wangqi198169@163.com 摘 要：低温、干旱、土壤盐渍化等非生物逆境环境会导致植物失水，严重时可造成细胞膨 压完全丧失，直至死亡。本研究以模式植物拟南芥为试验材料，以与抗逆密切相关基因CBF2 的启动子上游特定顺式元件ICEr2 作为“诱饵” ，利用酵母单杂交系统，克隆与其特异结合的 新转录因子基因－AtbZIP1 （At5g49450 ）；经结合特异性试验表明，AtbZIP1 基因在酵母体 内和体外能够与ICEr2 元件特异结合，并能够激活下游报告基因HIS3 的表达；利用Real-time PCR 方法和拟南芥渗透胁迫芯片杂交数据库的结果共同分析其表达特性，发现AtbZIP1 基因 可以在拟南芥的根和茎中表达，而且盐分可以诱导它在根中的高量表达。本研究对阐明转录 因子基因在植物渗透胁迫信号转导中的调控作用、抗渗透胁迫功能基因的调控表达以及渗透 胁迫相关应答机制奠定了重要理论基础。 关键词：ICEr2；AtbZIP1；拟南芥；转录因子 中图分类号：Q7 1. 引言 伴随基因组学研究的蓬勃发展，在 GeneBank 中登录的基因数目急剧增加， 当前重视 这一发展趋势，并充分利用网上资源，将使筛选新基因及鉴定基因功能的工作更方便快捷。 目前这方面的研究很多集中在对转录因子基因的克隆与功能鉴定上。真核生物中各种转录因 子在转录水平的调控是基因表达调控的重要方式之一。 转录因子一般都含有 DNA 结合区 与转录调控区， 通过与特异性的 DNA 元件的相互作用来调控生物体内相关靶基因在特定 条件（如环境胁迫）、特定组织中定时定量地表达。因此，要阐明细胞内各种信号转导与调 控基因表达的机制， 鉴定各种调控基因表达的 DNA 元件和转录因子至关重要。 干旱，高盐及低温是影响植物生长发育和农作物产量的限制因素。当植物受到这些非生 物逆境胁迫时，植物本身会发生一系列的生理生化变化，引发特异性胞内信号通路的激活或 抑制，以对逆境刺激做出相应的反应。属于 AP2 家族的 CBF/DREB(C-repeat binding factor/dehydrate responsive element binding factor)途径已被证实是赋予植物低温抗性的主效 途径，因而使其成为低温抗性领域研究的热点之一。作为冷应答反应主效途径的 CBF/DREB 信号通路属于非 ABA 依赖，拟南芥中存在大量启动子内具 DNA 顺式元件 CRT(C-repeat)/DRE(dehydration response element )[1] 的冷响应基因 (cold responsive, COR) ， CRT/DRE 以CCGAC 为核心保守识别区。反式作用因子 CBF/DREB 在低温及脱水胁迫条 件下与该元件特异作用，从而激活下游 COR 基因的转录表达。COR 基因在低温条件下 的特异表达对植物的逆境生存具有十分重要的意义，其编码产物既可能是对细胞起保护作用 的蛋白质产物，也可能是次级转录因子，调控其他功能基因的特异表达。CBF/DREB 转录 因子家族分为干旱及高 盐 诱 导 的 DREB2 小 家 族 和 冷 诱 导 的 CBF/DREB1 小家 族。 后者由 CBF1/DREB1B，CBF2/DREB1C，CBF3/DREB1A，CBF4/DREB1D，DREB1E ， DREB1F 组成，其中 CBF4/DREB1D 是渗透胁迫诱导的，而位于第 4 号染色体上 8.7kb 区 域内成簇排列的 CBF1、2 、3 是该领域的研究热点[1]-[3]，三个 CBF 基因均为单外显子结构， 1本课题得到国家自然科学基金资助项目(3057099