VEGF165真核表达载体构建及其对白血病细胞增殖和化疗药物敏感性影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2QQ ()； 二 · 533 · [文章编号】 1000-4718(2010)03—0533—06 VEGFl真核表达载体的构建及其对 白血病细胞增殖和 化疗药物敏感性的影响球 荆春霞 ， 张 洹 ， 杨 光 (暨南大学医学院 流行病学教研室，血液病研究所，。人体寄生虫学系，广东 广州510632) [摘 要】 目的：构建血管内皮细胞生长因子的真核表达载体，探讨其对 白血病细胞的增殖以及化疗药物敏 感性的影响。方法：应用常规基因克隆方法构建pEGFP—C1一hVEGF。真核表达载体，转染 白血病细胞K562，采 用CCK8法检测重组质粒对细胞增殖的影响，RT—PCR方法检测细胞血管内皮细胞生长因子 (VEGF)mRNA的表 达水平，ELISA方法定量检测细胞培养液和细胞内VEGF蛋白的表达水平，用流式细胞仪检测细胞周期。结果：经 酶切鉴定和基因测序证实成功构建了VEGF。真核表达载体。稳定转染 pEGFP—C1一hVEGF。65的K562细胞较转 染pEGFP—CI空质粒的K562细胞增殖加快，VEGF mRNA表达明显增加，细胞分泌VEGF蛋白水平上调。转染 pEGFP—C1一hVEGF 还可以提高白血病细胞在化疗药物高三尖杉酯碱和氟尿嘧啶作用时的细胞存活率。结论： VEGF，真核表达载体可以上调白血病细胞 K562的VEGFmRNA和VEGF蛋白的表达水平，从而促进 白血病细胞 的增殖，同时可以降低 白血病细胞对化疗药物高三尖杉酯碱和氟尿嘧啶的敏感性。 [关键词] 血管内皮细胞生长因子 ；真核表达载体 ；K562细胞；高三尖杉酯；氟尿嘧啶 [中图分类号] R733．7 [文献标识码] A ConstructionofVEGFeukaryoticexpressionvectoranditseffectsonpro- liferationandchemosensitivityin leukemiacells JINGChun—xia ，ZHANGHuan ，YANGGuang (DepartmentofEpidemiology，InstituteofHematology，DepartmentofParasitology，MedicalCollegeofJinanUniversity， Guangzhou510632，China．E—mail：咖hx@ ．edu．en) [ABSTRACT] AIM：Toconstructeukaryoticexpressionvectorofhumanvascularendothelialgrowthfactor (VEGF)gene，andtoexploretheeffectsofVEGFgeneonproliferationandchemosensitivityofleukemiacells．METH- ODS：TherecombinantcukaryoticexpressplasmidpEGFP—C1一hVEGF1 wasconsturctedwithconventional geneengi— neeringmethods．ThepEGFP—C1一hVEGFl65wastransfectedintoleukemiacellK562．Theproliferationoftherecombi— nanteukaryoticexpressionplasmidwasanalyzedbyCCK8method．ThelevelofVEGFmRNAwasdetectedbyreversetran— scriptionandqunatitativepolymerasechainreaction(RT—PCR)．TheexpressionlevelofVEGFproteinwasdeterminedby ELISA incellculturemedium andcells．Thecellcyclewasdetectedbyflow cytometry．RESULTS：VEGFl65eukaryotic