甘蓝型油菜透明种皮12-1(BnTT12-1)基因及启动子克隆.pdfVIP

甘蓝型油菜透明种皮12-1 （BnTT12-1 ）基因及启动子 的克隆1 1 1, 2 1 1 1 1 柴友荣 ，黄华磊 ，雷波 ，李加纳 ，吕俊 ，王瑞 1 西南大学农学与生物科技学院，农业部生物技术与作物品质改良重点实验室，重庆市油菜 工程技术研究中心，重庆 (400716) 2 重庆市农业科学院特色作物研究所，重庆 (401329) E-mail ：chaiyourong1@163.com 摘 要：黄籽性状形成的分子机理研究和基因工程是甘蓝型油菜品质改良的一个重要方面， 克隆种皮中色素和木质素积累相关的功能基因及种皮特异启动子是重要的技术前提。同属十 字花科的模式植物拟南芥中，种皮特异表达的TT12 （ 透明种皮12，AtTT12 ）基因编码一种 液泡型类黄酮/H+-逆向转运蛋白，将胞浆内合成的糖苷化的黄烷-3-醇转运到液泡中，供进一 步聚合形成种皮色素。本研究采用cDNA 末端快速扩增技术，获得了一条甘蓝型油菜 TT12 基因（BnTT12-1 ）的全长cDNA 和基因组序列，基因结构、蛋白结构、序列同源性分析均 显示它是AtTT12 的垂直同源基因。RT-PCR 检测表明，BnTT12-1 主要在发育早期和中期的 种子中表达。因此，推测 BnTT12-1 编码种皮特异表达的液泡型类黄酮/H+-逆向转运蛋白， 参与种皮色素的积累。根据与一个未注解的白菜BAC 克隆子的高度同源性，设计引物扩增 了BnTT12-1 转录起始位点5’的1566 bp 序列。预测BnTT12-1 启动子中存在多个可能的核心 启动子，其中位于实际转录起始点5’和3’相邻区域的TATA 盒、CAAT 盒等可能在转录中起 主要作用，预测5’ UTR 中oligo A 基序起始处反义链上的嘧啶富集区可能赋予高水平转录。 位于更上游的核心启动子元件也可能促进转录因子的召集，预测的光调控等应答元件可能参 与发育中的种皮中BnTT12-1 基因的表达调控。 关键词：甘蓝型油菜；类黄酮/H+-逆向转运蛋白；启动子；透明种皮12 （TT12 ）；黄籽性状 中图分类号：Q343.1+5 1. 引言 甘蓝型油菜（Brassica napus L. ，2n=4x=38 ，AACC ）是我国和世界性的重要油料作物， 提高菜油品质和菜籽饼的利用率是油菜育种的重要目标。与黑籽油菜相比，黄籽油菜的种皮 薄，皮壳率低，木质素和种皮色素少，种子含油量一般要高2～5 个百分点，菜油中的色素 污染少，油的精炼成本低，且菜籽饼的蛋白质含量大大提高，粗纤维含量大大降低，可以用 作畜禽饲料或加工食用蛋白的原料，经济价值大大提高。由于黄籽性状可从多方面同时改善 油菜的品质性状，世界各油菜主产国一直把黄籽油菜育种作为选育优质高效油菜新品种的一 个重要性状[1, 2, 3] 。但是，目前国内外甘蓝型油菜黄籽性状的研究与应用仍然存在一些重要 问题。白菜型油菜和甘蓝中均存在表型稳定的天然黄籽基因型，但由它们的基因组融合而产 生的异源四倍体物种甘蓝型油菜中缺乏天然的黄籽基因型，已有的则是 1960 年代以来瑞典 Olsson、中国刘后利等人从种间远缘杂交的后代中选择而来[1, 3, 4, 5] 。而且甘蓝型油菜的黄籽 性状的遗传机理至今不明，典型特征是黄籽率和黄籽度不高，表型不稳定，易受环境影响而 变异，选育效率低，育种周期长，黄籽品种少，且负相关性状难以克服，远远不能满足生产 要求[5] 。当前急需解决的问题是克隆黄籽性状相关的重要功能基因，尤其是参与油菜种皮色 素和种皮木质素等成分合成、转运和积累的重要结构基因和调控基因。 种皮颜色特性与类黄酮生物合成相关。拟南芥（Arabidopsis thaliana ）等植物中种皮色 素的主要成分是原花青素单体（PA ，又叫缩合单宁即CT ）的聚合物，是由公共苯丙烷途径 1 本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金(20040625007)、重庆市自然科学基金重点项目(8446)、国家 自然科学基