吉非替尼耐药细胞株筛选和基因谱表达的研究.pdfVIP

维普资讯 · 552· 肿瘤 2008年7月第 28卷第 7期 TumorVo1．28，No．7，July，2008 譬 ×：1： ：茸 茹：：导※ 瓣 誊撼 ；i簿：：；箍 DOI：10．3781／j．issn．1000-7431．2008．07．003 警每 i 吉非替尼耐药细胞株的筛选和基因谱表达研究 粟 波，苏春霞，张海平，邓沁芳，赵印敏，周彩存 (同济大学附属上海市肺科医院肿瘤科，上海 200433) [摘要] 目曲：从对吉非替尼(gefitinib)敏感的肺腺癌细胞株PC9中筛选并建立了6株gefitinib耐药细胞亚克隆并研究其生 物学特性。方 法：采用N一甲基一N-硝基一N-亚硝基胍(MNNG)诱变筛选和有限稀释法进行耐药性亚克隆的单细胞培养，MTI 法检测肿瘤细胞对gefitinib的敏感性和IC5。，DNA微列阵检测耐药细胞株与野生型PC9细胞的基因表达差异，免疫组织化学 法测定细胞外间质成分fibronectin和conagen1V的表达差异，FCM法进行细胞周期分析。结果 ：获得了对gefitinib具有较高 耐药性的2个细胞株：PC9／G2和PC9／G4，尤其PC9／G2的，c50为7～10ixmol／L，较野生型PC9细胞 (，c50：0．03～0．05p,mol／ L)提高耐受性 160～260倍。PC9的细胞倍增时间为(16．24-3．5)h，PC9／G2的倍增时间为(36．54-4．8)h。PC9／G2同PC9的 基因表达谱存在明显差异，耐药细胞株PC9／G2的脂肪酸代谢和氧化磷酸化基因表达下降，糖酵解基因表达上升，核糖体各亚 基蛋白表达下调 ，高尔基体和囊泡、笼形蛋 白衣被小泡等相关基因表达上调，细胞蛋白分泌功能加强；泛素．蛋白酶体循环相关 基因上调；DNA修复基因和解旋酶类基因表达上调；具有蛋 白激酶活性的3O个基 因表达上调，11个基 因表达下调；15个磷酸 化蛋 白磷酸酶活性的基因表达上调；具有GTP结合活性的基因21个表达上调，4个下调；涉及细胞骨架和细胞运动功能的8 个基因上调；整合素B1亚基、类胰岛素受体、NFKB级联反应的正向调节因子表达上调。结论 ：成功建立了6株PC9细胞的 gefitinib耐药细胞株，初步研究表明对gefitinib中度耐药可能与细胞外基质组分改变及其黏附信号通路有关，对gefitinib高度 耐药则可能涉及替代性信号通道的激活和信号通道的下游激活。 [关键词] 肺肿瘤；抗药性，肿瘤；细胞，培养的；基因表达；吉非替尼 [中图分类号] R733．7 [文献标志码] A [文章编号] 1000-7431(2008)07-0552-06 Selectionandestablishm entofgefitinib-resisatntPC9celllineand itsgeneexpressionprofile SUBo，SUChun—xia，ZHANGHai-ping，DENGQin-fang，ZHAOYin-min，ZHOUCai-cun (DepartmentofOncology，Shang— haiPulmonaryDiseaseHospitalAffiliatedtoTon~iUniversity，Shanghai200433，China) [ABSTRACT] Objective：Toestablish6subclonesofgefitinib-resistantcellsfromgefitinib-sensitivelungadenocarcinomacellline PC9andstudytheirbiologicalcharacteristics．M ethods：ThePC9cellswereinducedtomutatebyamutagenMNNG andselected．The subcloneofgefitinib—resistantcellwasobtainedbylimiteddilution．Thesensitivityan