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瘤胃中小韦荣球菌H2基因组文 库的构建及ACK基因的克隆 报告人：杨文艳 刘国文 逄晓阳 导 师：王 哲 教授 国家自然科学基金重点项目(资助 吉林大学动物营养代谢病与中毒病研究室 前言 以围产期能量代谢障碍为病理学基础 的酮病和脂肪肝（妊娠毒血症、肥胖综合 征）是奶牛重要的群发性常见多发病，目 前认为其主要机理是能量供给不足而需求 增加所致的能量负平衡，从而导致糖和脂 肪代谢紊乱。目前国外学者主要采用补充 生糖先质（葡萄糖、丙二醇等）的办法来 防治，但存在着费时费力的主要特点。 反刍动物的能量代谢不同于其他动物， 主要靠瘤胃微生物发酵产生的乙酸、丙酸、 丁酸等挥发性脂肪酸供能，而由生糖先质丙 酸经肝脏糖异生生成的葡萄糖约占45 ～ 50%。根据这些特点，运用微生态理论，通 过筛选、改造与丙酸生成有关的瘤胃发酵 菌，调控瘤胃微生物发酵产生乙酸、丙酸的 比例，为防治围产期奶牛能量代谢障碍性疾 病开辟新的途径 。 小韦荣球菌 小韦荣球菌（Veillonella Pryvula）是瘤 胃中的G-小球菌，是一种不发酵碳水化合物，发 酵乳酸盐生成乙酸、丙酸两种挥发性脂肪酸的丙 酸生成优势菌。由于目前对小韦荣球菌的遗传学 背景知之甚少,它的很多功能基因及其调控序列 尚属未知,这些因素大大限制了实际应用的研究, 因此构建小韦荣球菌基因组文库为下一步获取小 韦荣球菌的重要基因(比如ACK、PTA基因) 提供 前提条件，然后根据目的要求对基因进行分子操 作，为进一步的研究奠定基础。 乳酸代谢示意图 一、小韦荣球菌的分离鉴定 1 小韦荣球菌的分离 对健康奶牛进行瘤胃穿刺，抽取瘤胃 液，滤网过滤，在小韦荣球菌特异厌氧培 养基上进行分离培养，根据菌落特征，选 取可疑菌落，纯培养后进行形态学、染色 特性、生化特性等初步鉴定 。 图1 小韦荣球菌株的形态学鉴定结果 fig1.Resultof mophoric identification for veillonella parvula 2 小韦荣球菌的鉴定 ⑴生化反应鉴定法： 鉴 阿 木 鼠 山 葡 甘 果 半 蔗 麦 纤 乳 蕈 淀 菊 定 拉 李 梨 萄 露 乳 芽 维 管 伯 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 糖 二 糖 糖 粉 糖 糖 糖 结 - - - - - - - - - - - - - - - 果 鉴 甘 山 赤 肌 侧 苦 水 七 尿 还 靛 半 硫 明 胆 定 露 梨 藓 金 杏 杨 叶 原 基 固 化 管 醇 醇 醇 醇 盏 仁 苷 苷 素 硝 质 体 氢 胶 汁 花 苷 酸 醇 盐 结 - - - - - - - - - + - - - - - 果 （2 ）小韦荣球菌16S rRNA鉴定 根据GeneBank中小韦荣球菌