4种重要虫媒病的核酸液相芯片高通量检测方法的建立.pdfVIP

畜牧兽医学报 2010，41(2)：240—245 ActaVeterinariaetZootechnicaSinica 4种重要虫媒病的核酸液相芯片高通量 检测方法的建立 詹爱军 ，王新卫。，卢体康 ，陈书琨 ，孙 洁 ， 陈 兵 ，曾少灵 ，花群义 (1．深圳 出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心 ，深圳 518010 2．河南农 业大学牧医 程学院 ，郑州 450002) 摘 要 ：为建立可检测鹿流行性出血热病毒(EHDV)、阿卡斑病毒(AKV)、蓝舌病病毒 (BTV)和水泡性 口炎病毒 (VSV)的液相芯片快速检测技术 ，用 DNAStar软件对 GenBank中BTV的VP7基 因、EHDV 的vP7基 因、AKV 的N基 因和 VsV的NP基 因序列进行序列分析 ，设计针对这些基 因的特异性探针并标记生物素，分别与不同编号 的荧光编码微球偶联后再与这些病毒相应基因的PCR产物杂交反应 ，用液相芯片检测仪 (Liquichip200)检测荧光 信号建立 了以上4种虫媒病的快速液相芯片检测方法。检测结果显示 ，该方法具有较好 的特异性 ，偶联特异性探 针的微球只与相应 的病毒基 因的PCR产物反应，而不与其他虫媒病病毒反应 ；检测灵敏度达到 5O～100个 TCIDs。。本研究建立了可 以同时检测鹿流行性出血热病毒、阿卡斑病毒、蓝舌病病毒和水泡性 口炎病毒 的快速高 通量液相芯片技术 ，为其他类似病毒 的快速高通量检测提供了借鉴和经验 。 关键词 ：鹿流行性 出血热病毒 ；阿卡斑病毒 ；蓝舌病病毒 ；水泡性 口炎病毒 ；液相芯片检测技术 中图分类号 ：$854．43 文献标识码 ：A 文章编号：0366—6964(2010)02—0240—06 DevelopmentofLiquichip TechniquetoDetectFour Insect—borneDiseaseVirusRapidly ZHANAi—jun ，WANG Xinwei。，LUTikang，CHEN Shu—kun ，SUNJie， CHENBing，ZENG Shao-ling ，HUA Qun-yi (1．TechnicalCenterofAnimalandPlantQuarantineInspection，ShenzhenCIQ， Shenzhen518010，China；2．CollegeofAnimalHusbandryandVeterinary， HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China) Abstract：Theaim istodevelopliquichip techniquetodetectinfection ofepizootichaemorrhagic diseasevirusofdeer (EHDV)，akabanevirus(AKV)，bluetonguevirus (BTV)，andvesicular stomatitisvirus (VSV)．TheVP7geneofEHDV，N geneofAKV 。VP7geneofBTV andNP geneofVSV in theGenBank wereanalyzedbyusing thesoftwareDNAStar5 ． 0．Specificgene probesofallthesefourviruseslabeledwithbiotinwerepreparedandco