猪带绦虫谷胱甘肽转移酶GST的原核表达及免疫学研究.pdfVIP

2O10．26 (2) 中 国 人 兽 共 患 病 学 报 ChineseJournalofZoonoses 107 文章编号：1002—2694(2010)02—0107一O4 猪带绦虫谷胱甘肽转移酶 GST的 原核表达及免疫学研究* 戴佳琳 ，黄 江，廖兴江，江 楠 ，王 宇，刘玉江 摘 要 ：目的 通过对猪带绦虫谷胱甘肽转移酶GST的表达 ，对其免疫性进行初步研究。方法 利用生物信息学从猪带 绦虫成虫cDNA质粒文库 中筛选 出谷胱甘肽转移酶 (GST)基 因，将其克隆到原核表达载体 pET28a(+)，经过双酶切 、PCR鉴 定后 ，异丙基一BD半乳糖苷 (IPTG)诱导表达 ，并通过十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶 电泳 (SDS)鉴定，重组后 的蛋 白 用 His一镍蛋 白纯化柱纯化，纯化 的重组蛋 白用蛋 白印迹进行 免疫 学分析 ，Westernblotting鉴定该蛋 白免疫反应性。结 果 成 功构建 了重组体 ，并得到高纯度蛋 白，该蛋 白可被感染猪带绦虫 的病人及猪 、感染牛带绦虫病人及感染亚带绦虫病人血清所 识别。结论 猪带绦虫谷胱甘肽转移酶可在原核系统 中获得具有免疫反应性的高效表达。 关键词 ：猪带绦虫；谷胱甘肽转移酶 ；原核表达 ；免疫反应性 中图分 类号 ：R38332 文献标识码 ：A Prokaryoticexpressionofglutathionetransferasegene from Taeniasolium and itsimmunologicalinvestigations DAI～Jialin，HUANGJiang，NIAO—Xinjiang，JIANG Nan，WANGYun，LIU—Yujiang (TheExperimentalCenter brBasicM edicalMorphology，Guiyang550004，China) ABSTRACT：Inthepresentstudy，theprokaryoticexpressionofglutathionetransferase (GST)genefrom Taeniasolium anditsimmunologicalpropertieswereinvestigatedbymeansofbiologicalinformaticsmethods．TheGST genefrom T．solium wasscreenedfrom ThecDNA plasmid libraryoftheadultworms．Thisgenewasclonedintoprokaryoticexpressionplasmid pET28a(+)andthenexpressedinE．coliBI21(DE3)afterdoubleenzymedigestion，PCR identificationandIPTG induction． TheexpressedproductwasidentifiedbySDSPAGE andtherecombinantproteinwaspurifiedthroughpurificationcolumnof His—Ni protein．M eanwhile，theimm unoreactivityofthepurifiedproteinwasanalyzedbyW esternblotassay．Intheseways， therecombinantsweresuccessfullyconstructedandthehighlypurifiedproteinswereobtained．Itwasdemonstratedthatthese proteinscouldberecognizedbyseraofpatientsinfectedwithT．asiticaandT．rhynchussaginatus．From theseobservations，it isevidentthathighlyefficientexpressionofGST ofTaeniasoliurn withdefiniteimmunoreactivitycan