猪维甲酸诱导基因Ⅰ的克隆及其在诱导Ⅰ型干扰素中的作用.pdfVIP

畜牧兽医学报 2010，41(2)：135—140 ActaVeterinaria etZootechnicaSinica 猪维 甲酸诱导基因 I的克隆及其在 诱导 I型干扰素中的作用 王 荡 ，方六荣 ，梅小伟 ～，谢立兰 ，陈焕春 。，肖少波 。 (1．华中农业大学动物医学院动物病毒室，武汉 430070；2．华 中农业大学 农业微生物学 国家重点实验室，武汉 430070) 摘 要：本研究 旨在探讨猪维 甲酸诱导基 因I(】I I)的结构特征及其在 I型干扰素信号通路 中的作用 。从猪外周 血单核细胞 中克隆猪 RIG-I全长 cDNA，进一步构建猪 RIG-I全长及不 同区域缺失突变体 的真核表达载体 ，通过 IFN—B、IRF3和 NF—KB的荧光素酶报告系统分析猪 RIG-I在诱导 I型干扰素中的作用 。结果表 明，猪 RIG-I开放读 码框全长为 2832bp，编码 943个氨基酸 ，与鸭嘴兽 、大 鼠、小 鼠、猴 、黑猩猩 、人、马和牛 RIG—I相应序列的同源性为 53．2 ～83．2 。猪 RIG-I超表达能显著激活转录 因子 IRF3和 NF-~B，并诱导 IFN—p的产生。缺失猪 RIG-I的 CARD区不仅不能激活下游信号，而且还负调控 poly(I：c)诱导IFN8的能力。结果提示 RIC~I是猪天然免疫系统 中的一个模式识别受体 ，在 I型干扰素诱导 的信号通路 中具有重要作用 。 关键词 ：猪 ；RIG-I；克 隆；序列分析 ；干扰素；信号通路 中图分类号 ：$828；s813．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：0366-6964(2O10)02—013506 M olecularCloningandFunctionStudyonInduction ofTypeIInterferonof PorcineRetiaoblastoma—inhibitingGeneI WANG Dang 一，FANG Liu—rong ～，MEIXiao-wei ，XIE Li—lan ， CHEN Huan-chun ”．XIA0 Shao-bo ， (1．LaboratoryofAnimalVirology，CollegeofVeterinaryMedicine，HuazhongAgricultural University，Wuhan430070，China；2．NationalKeyLaboratoryofAgriculture Microbiology，HuazhongAg。riculturalUniversity，Wuhan 430070，China) Abstract：ThisexperimentwasconductedtostudythestructuralcharacterizationOfporcnieRIG—I (poRIG—I)anditsroleintypeIinterfercnsignalpathway．ThefulllengthcDNA ofpoRIG-1was amplifiedfrom porcineperipheralbloodmononuclearcells(PBMCs)byRT—PCR．Theeukaryotic expressionvectorofpoRIG-Ifull—length andthemutatedpoRIG-1wereconstructed，respective— ly．TheroleofpoRIG IintheinductionoftypeIinterferonwasinvestigatedbyusingIFN—B， IRF3andNF—B luciferasereportersystem ．Theresultsshowedthattheopenreadingframeof poRIG—Iis2832bpencoding943amino acids．TheputativepoRIG—Iprotein exhibitedidentity wit