广西六堡茶化学成分分离、活性分析及茶褐素提取工艺研究.pdfVIP

广西六堡茶化学成分分离、活性分析及茶褐素提取工艺研究 IV 广西师范学院硕士学位论 摘要 六堡茶是中国黑茶之一，具有悠久的生产历史，多种生物活性。针对六堡茶的研究主要 是加工工艺，化学成分的研究较少。本课题对广西六堡茶的有效化学成分进行分析，并对茶 褐素进行提取工艺优化。主要结果如下： 1. 活性分析： 六堡茶经 95% 乙醇浸提后，用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，各萃取相蒸干，4 个极性部分的浸膏分别进行抗氧化、抗菌和抗肿瘤实验。抗氧化实验中分别选取 DPPH 自由 基、羟基自由基、超氧阴离子自由基通过测定吸光度值判断各极性部分的抗氧化能力，通过 数据分析，乙酸乙酯相和正丁醇相具有较好的抗氧化能力，特别是对 DPPH 自由基的清除率 值较高；通过最小抑菌浓度法(MIC)选取革兰氏阴性的铜绿假单胞菌、大肠杆菌以及革兰氏阳 性的金黄色葡萄球菌、白色念珠菌四种菌种对经过水提萃取后的4 个极性部分和 95% 乙醇提 取萃取后的 4 个极性部分进行抗菌活性实验，对大肠杆菌的抑菌效果优于对其它细菌的抑制 作用；浸膏分别对胃癌细胞MGC-7901、人宫颈癌细胞 Hela 、肝癌细胞 7404 进行毒性测定， 通过数据分析，依据 IC50 值判断活性效果，与预期差别较大，对这三种癌细胞的抑制作用较 小。 2. 化学成分分析： 六堡茶提取物经萃取后，石油醚相和乙酸乙酯相通过 GC-MS 分析挥发性成分，并对石 油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相用柱层析进行分离鉴定。化学成分分离得到 9 个化合物，已 鉴定出 5 个化合物，分别是棕榈酸、咖啡因、没食子酸、没食子酸甲酯、α-菠甾醇。 3. 工艺提取纯化： 采用纤维素酶辅助法提取六堡茶中的茶褐素，分别对酶解温度 (A) 、酶解用量 (B) 、pH 值 (C) 、酶解时间 (D) 四个影响因素通过单因素和正交实验对比分析，得到了茶褐素提取的 最佳工艺条件，产率达到 24.50% 。 用大孔树脂对茶褐素进行富集纯化，首先选取 D900 、DM-301、ADS-17、D101 、S-8 五 种不同型号的大孔吸附树脂通过静态吸附，比较吸附率与解析率的综合效果，确定了 D101 作为纯化茶褐素的大孔吸附树脂。其吸附率是 43.65% ，解析率是 67.09% 。确定了茶褐素溶 液浓度、洗脱剂、洗脱速度、pH 值对纯化的影响。 选用葡聚糖凝胶柱层析的方法对茶褐素进行分级分离，丙酮-水做洗脱剂，按照色谱带的 不同得到了 个级分，分别通过紫外和红外光谱观察，数据分析表明茶褐素的组成与结构复 杂。 关键词：六堡茶；活性分析；化学成分；提取；纯化；分级 I 广西六堡茶化学成分分离、活性分析及茶褐素提取工艺研究 II 广西师范学院硕士学位论