免疫亲和色谱-HPLC-FLD法测定动物肝脏中10种喹诺酮类药物残留.pdfVIP

第37卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第3期 of 335—340 2009年3月 ．．ChineseJournalAnalyticalChemistry 免疫亲和色谱一HPLC-FLD法测定 动物肝脏中10种喹诺酮类药物残留 赵思俊1，2 郑增忍圯 曲志娜2 江海洋1 张素霞1 沈建忠“ 1(中国农业大学动物医学院，北京100094) 2(中国动物卫生与流行病学中心，农业部动物及动物产品卫生质量监督检验测试中心，青岛266032) 摘要利用免疫亲和色谱净化技术建立了可同时检测动物肝脏组织中10种喹诺酮类药物(麻保沙星、环 丙沙星、诺氟沙星、单诺沙星、洛美沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、二氟沙星、恶喹酸和氟甲喹)的高效液相色谱检 测方法。对利用喹诺酮抗体制备的免疫亲和色谱柱的性能、操作条件进行了考察和优化。抗体的偶联量为 5 mg／L g／L，其对lO种喹诺酮药物的柱容量为3．75—6．67斗moL／Lgel(1425—2135gel)，选用y(甲醇)： 复使用20次后，药物的回收率与样品的净化效果无明显变化。动物肝脏组织样品用PBS溶液提取，IAC柱净 0．15斗g／kg；10种喹诺酮类药物在动物肝脏的平均回收率为74．7％一94．8％，相对标准偏差为3．9％一12．1％。 关键词喹诺酮类药物，免疫亲和色谱，肝脏组织，高效液相色谱法，多残留 引 言 或滥用药物，容易导致QNs在食品中残留，还可造成敏感细菌产生耐药性，我国、欧盟等许多国家和组 织已相继制定了多种QNs药物在动物肌肉组织中的最高残留限量¨’21。目前对动物性食品中QNs残留 进行监测是确保食品安全和人类健康的一个重要途径。 由于动物组织尤其是肝脏组织成分比较复杂，样品杂质不仅影响待测物的检测，还可能损伤仪器和 降低仪器使用寿命。因此，净化分离样品中存在的痕量待测物已成为兽药残留分析领域研究的热点和 难点。QNs药物在动物组织中残留分析的前处理主要有液液萃取法…、固相萃取法H1、加速溶剂萃取 法哺3及分子印迹固相萃取¨1等，但由于这些方法净化喹诺酮类药物的原理主要是利用分子的极性等特 点，特异性差，与待测物性质相近的杂质也容易被共萃取，影响净化效果。同时，在净化过程中还使用了 较大体积的有机溶剂。 免疫亲和色谱技术是以抗体、抗原特异性的分子识别为基础的色谱技术，是一种选择性强、特异性 法]。应用IAC技术可使组织样品的前处理过程简化，一步即可达到净化与浓缩的双重目的，使实际 检测工作更加迅速、简便。 本实验旨在利用喹诺酮单克隆抗体制备的免疫亲和色谱柱，建立可同时测定动物肝脏组织中麻保 沙星、环丙沙星、诺氟沙星、单诺沙星、洛美沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、二氟沙星、恶喹酸和氟甲喹10种 QNs药物多残留的HPLC—FLD方法。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 mm×4．6 高效液相色谱仪(美国Waters公司)；SymmetryC18色谱柱(250 mm，5斗m，Waters公司)； N．EVAPTM．111氮吹仪(美国Organomation 2008_05．06收稿；2008-09—23接受 本文系国家杰出青年科学基金(No和“十一五”国家科技支攘计划(No．2006BAK02A08)资助项目 ·E—mail：sjz@cau．edu．cn 万方数据万方数据 336 分析化学 第37卷 公司)。溴化氰活化的Sepharose 均为国产分析纯；喹诺酮单克隆抗体为本实验室自制。 2．2溶液的配制 (1)标准贮备液 FLU，溶解于0．03％NaOH溶液中，用甲醇定容至100mL，即为100mg／L的标准贮备液；分别量取适量