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定量PCR实验数据处理1./yp/product-list-128.html定量PCR的实验要素目标基因未知样品生成标准曲线标准品梯度监控系统故障阳性对照监控污染阴性对照校准生物学误差??管家基因(IPC)校准物理误差??参比荧光(ROX)降低其余误差重复实验96孔板设置举例样品标准品??目的：生成标准曲线，建立CT值与浓度之间的数学关系??不要求：??数学关系是抽象的，不要求标准品与目标基因使用相同的DNA??可以使用相同的DNA??也可以使用不同的：PCR产物、质粒、病毒、人工合成片段……??要求：??5点以上??浓度已知??PCR效率一致，且接近100%?仪器一致?反应条件一致：循环参数、同一次实验?试剂质量一致：模板、引物和探针Tm值、酶及缓冲液梯度稀释方法选择目标、提取/PCR、纯化、测定浓度、调整浓度、梯度稀释CT值在18-30之间，覆盖全部样品浓度区间10倍连续梯度稀释方法：1v原液(标准品i) +9v稀释缓冲液，得标准品ii1v标准品ii+9v稀释缓冲液，得标准品iii1v标准品iii +9v稀释缓冲液，得标准品iv1v 标准品iv +9v稀释缓冲液，得标准品v切不可由标准品I分别加不同体积的稀释缓冲液直接得到标准品ii、iii、iv、v 标准品单位标准品的性质决定最终结果的性质：DNA 标准品，已知拷贝数→绝对定量，得未知样品拷贝数DNA标准品，已知ng/uL→绝