Taura综合征病毒套式RT—PCR检测方法的建立及应用.pdfVIP

维普资讯 l5 广西水产科技 Taura综合征病毒套式 RT—PCR检测方法的建立及应用 黄玉英 黎小正 韦信贤 吴祥庆 黄国秋 黄玉柳 (广西渔业病害防治环境监测和质量检验 中心 530021) 摘 要 Taura综合征病毒 (，I’SV)是世界动物卫生组织 (OIE) 目录规定的水生动物二类疫 病病原体。本研究在 RT—PCR方法检测TSV行业标准的基础上 ，优化建立了能更准确检测TSV的 套式RF—PCR。特异性和敏感性试验结果表明，该套式RT—PCR能对2个试验用 V毒株的RNA 进行扩增 ，并得到与预期大小一致的231bp的扩增产物 ，而其它2种对虾病原则无相 同大小的特 异性扩增产物出现 ；所建立的套式RT—PCR的灵敏度大约为常规 RT—PCR的 10 倍，最低可检测到 10rg的TSVRNA。分别应用两种 RT—PCR方法对 18O份分别来 自广西沿海不 同对虾养殖场的对虾 临床样品进行检测，其中套式RT—PCR共有52份检 出TsV，而常规RT—PCR仅有23份栓出 V。 表明所建立的套式RTPCR提高了1、sV的阳性检出率，较普通的常规RT—PCR有更大的应用价值 和意义。 关键词 Taura 综合征病毒 套式RT—PCR 灵敏度 阳性检出率 Taura综合征 (Taurasyndrome，TS)是 目前国内外诊断TSV的方法，包括在 由Taura综合征病毒 (Taurasyndromevirus， 健康虾中接种病毒观察其典型的I临床体征、 TSV)引起的一种对虾传染病，近年来严重 组织病理学检查、核酸点杂交和原位杂交、 制约对虾养殖业 的健康发展，被世界动物卫 免疫组化及 RT—PCR检测等。国家质检总局 生组织 (OIE)列为必须 申报的疾病…。该 也已颁布利用RT．PCR方法检测TsV的行业 病最早在 1992年厄瓜多尔Taura河附近 的 标准。与传统方法相 比，逆转录一聚合酶链 对虾养殖场发现并报道幼虾感染rrSV_2J。虾 式 反 应 (reverse transcription-polymerase 感染TSV后病死率高达60％一90％。据估 chainreaction，RT—PCR)具有灵敏度高、特 计，从 1992年至1996年在美洲由TSV造成 异性强、操作简便和快速等特点，是诊断病 的经济损失高达 12—20亿美元。由于对 原体的一种有效的现代分子生物学技术。套 TSV的防治至今 尚无有效措施 ，近年来该病 式RT．PCR则是以常规 RT．PCR为基础 ，在 毒逐渐波及到泰 国、马来西亚、印度尼西 特异性和灵敏度方面又有质的提高，因此在 亚、中国等东亚和东南亚 国家 ’4J。广西 对虾病毒学领域具有更广阔的应用前景。结 北海 、钦州 、防城等沿海地区是对虾养殖业 合检疫工作实际，本研究在 RT—PCR方法检 较为发达的地区，近年来随着对虾种苗和水 测 TSV行业标准的基础上，根据已发表 的 产品国际贸易交流增多，TSV在该地区也呈 TSV基因序列，利用Oligo6．1软件 自行设计 现出流行趋势，给对虾养殖业造成了严重的 一 对套式 TSV外引物，优化建立 了检测 经济损失。 rrSV的套式RT—PCR，以期提高rI、sV的阳性 维普资讯 广西水产科技