中医试验三课件.pptVIP

第三次实验 基本培养基的制备、常用培养基的种类 细菌的接种（平板划线、斜面接种、肉汤接种） 细菌代谢产物的检查（双糖、硫化氢、色素） 消毒与灭菌 基本培养基的制备 牛肉去筋膜后切碎 称取牛肉500克加水1000ml，放冰箱一晚——次日取出煮沸，半小时后过滤——加入蛋白胨1%、氯化钠0.5%、硫酸氢二钾0.1%——校正PH7.4-7.6——过滤——分装，灭菌 加入肉渣——碎肉培养基 琼脂0.5%——半固体 琼脂0.1%——固体 常用培养基的种类与作用 半固体 血平板 斜面 肉汤培养基 一、基础及常用培养基的种类 培养基种类 用途 液体培养基 供增菌及其他培养基基础 普通琼脂培养基 供分离细菌 半固体培养基 供保存菌种和观察细菌 动力 血液琼脂培养基 供营养要求较高的细 菌生长 细菌的培养 1 培养基培养基.ppt 注意 1 烧灼接种环 2 烧灼后冷却再继续操作。 二、细菌代谢产物的检查—鉴别细菌 1、糖发酵试验 原理：某些细菌可分解糖 材料： 单糖管+倒置小试管——-1%各种糖加入无糖蛋白胨水培养基 指示剂：酚红（碱性：红；酸性：黄色） 记录： 2、硫化氢试验 原理：某些细菌分解胱氨酸—H2S+醋酸铅 ——硫化铅（黑色） 结果 意义 大肠杆菌 变形杆菌 3、细菌的色素 色素 意义 金黄色葡萄球菌 绿 脓 杆 菌 广州中医药大学 微生物学与寄生虫学教研室 细菌的人工培养 1、 1、平板划线分离培养(操作） 借助划线而将混合菌液在琼脂平板的表面 分散开来，使个别细菌能固定在一个点上 生长繁殖，形成单个菌落，以此达到分离 获得纯种的目的，并根据各种菌落的特征， 鉴别细菌。 方法： 用无菌接种环取一环混合菌液。 接种时，左手拿琼脂平板底部，并使平板倾斜，以免 空气中的细菌的落入培养基中，并且靠近火焰。 右手握持沾菌的接种环，涂抹在琼脂平板的上端，然 后不同方向轻轻划线，勿划破琼脂。 划线完毕，接种环灭菌后放回原处，平板置37?C温箱 培养18-24小时。 观察结果，根据菌落特征鉴别细菌。 2 接种的技术 第1组线 第2组线 第3组线 第4组线 常用灭菌法 物理： 干热法：干烤，烧灼 湿热法：高压蒸汽 紫外线：紫外灯 放射线，微波等 化学：各种酸碱消毒剂，有机消毒剂， 氧化剂，重金属等 高压蒸汽灭菌： 压力： 102.97kpa 15磅/ cm2 温度：121.3 。C 时间：20－30min 适用范围：耐高温，耐湿热的物品 培养基，部分试剂，衣物， 塑料橡胶制品 操作步骤： 1 准备 加水 物品的包装 2 装桶 加盖 3 加热 放空气 5磅 3－5min ！！ 4 继续加热 15磅 30min 5 冷却后取物 紫外线杀菌 特点： 杀菌力强 穿透力差 可被玻璃 纸片吸收阻挡 适用范围：空气及物体表面 常用于手术室及无菌操作室 注意：1物体表面需擦净 2紫外线对人体也有害， 使用时应避开 验证紫外线的杀菌特点： 广州中医药大学 微生物学与寄生虫学教研室