蛇床子总香豆素主要有效组份在大鼠和人肝微粒体中代谢与研究.pdfVIP

摘要 摘要 背景： 蛇床子的有效成分为香豆素类化合物，其中含量最高的两种香豆素类化合 床子以及Ost、Imp两种香豆素单体的研究报道集中在它们的药效方面，对其药 代动力学及代谢途径的研究就比较局限。本课题预期通过对Ost及Imp体外代谢 情况的研究，丰富对蛇床子总香豆素主要有效组份的认识，阐明参与药物代谢的酶， 评价药物与代谢酶间的相互作用，为理解药物代谢的机制、预测药物相互作用和药 物代谢多态性以及指导临床合理用药提供理论依据。 目的： 通过肝微粒体体外代谢研究法研究中药蛇床子中的有效单体蛇床子素 (Ost)、欧前胡素(Imp)在大鼠和人肝微粒体中的代谢途径和机制，探明Ost， Imp在大鼠和人肝微粒体中的酶促动力学特征，以及CYP450酶抑制剂对Ost， Imp代谢的影响，明确参与Ost和Imp在大鼠和人肝微粒体中代谢的相关CYP450 酶。丰富对蛇床子总香豆素主要有效组份的认识，为更深入地研究其药代动力 学及临床上合理用药提供理论和实验依据。 方法： 1、建立Imp，Ost的HPLC．UV检测方法。 2、通过温孵时间、肝微粒体浓度、底物浓度三个方面来考察Imp在大鼠和 人肝微粒体中的酶促动力学特征。 在大鼠和人肝微粒体中代谢的影响。 4、通过温孵时间、肝微粒体浓度、底物浓度三个方面来考察Ost在大鼠和 人肝微粒体中的酶促动力学特征。 摘要 在大鼠和人肝微粒体中代谢的影响。 结果： 1、建立了检测肝微粒体中欧前胡素(Imp)和蛇床子素(Ost)的高效灵敏 HPLC方法。 均呈线性消除，故选择的孵育时间为30min；在0．05．0．20 mg／ml范围内，Imp的 消除随肝微粒体蛋白浓度增加而加快，故确定肝微粒体浓度均为0．2mg／ml。在 O．8．12．8“M浓度范围内，Imp的代谢消除量随底物浓度的增加呈近似线性的增 加，当Imp浓度达到25．6“M时，它的代谢均呈饱和状态，这些均表示Imp在大 鼠和人肝微粒体的代谢符合典型的酶促动力学特征。根据Eadie—Hofstee方程计 算Imp在大鼠和人肝微粒体中的酶促动力学参数。在大鼠肝微粒体中： Vmax=3 1．50i1．32nmol／min／pmol，Km=l834士1．07pM，Clint=1．72+0．11mL／min／pmol； mL／min／pmol。 3、甲氧苄氨嘧啶、0【．萘黄酮明显抑制了低中高三个浓度的Imp在大鼠肝微 粒体中的代谢。进一步在人肝微粒体考察表明Q．萘黄酮也能明显抑制了低中高 三个浓度的Imp的代谢，同时奎尼丁对低浓度Imp的代谢以及甲氧苄氨嘧啶对 高浓度Imp的代谢也有抑制作用。 5-20min均呈线性消除，故选择的孵育时间为20min；在0．05．0．20 mg／ml范围内， Ost的消除随肝微粒体蛋白浓度增加而加快，故确定肝微粒体浓度为0．2mg／ml。 在1．6—19．2p．M浓度范围内，Ost的代谢消除量随底物浓度的增加呈近似线性的增 加，当Ost浓度达到38．4¨M时，它的代谢呈饱和状态，这些均表示Ost在大鼠 和人肝微粒体的代谢符合典型的酶促动力学特征。根据Eadie．Hofstee方程计算 Ost在大鼠和人肝微粒体中的酶促动力学参数。在大鼠肝微粒体中： 1．1 VmaC6．58-+0．76nmol／min／pmol，l鼯57i6．32吣／t,C鼯7．76：士1．0 lmL／min／pmol；在^、肝微 5、酮康唑对低中高三个浓度的Ost在大鼠肝微粒体中的代谢均有抑制作用； 进一步在人肝微粒体中考察，结果表明酮康唑对低中高三个浓度的Ost有抑制作 Ill 摘要 用，同时奎尼丁和磺胺苯吡唑也能抑制高浓度的Ost在人肝微粒体中的代谢。 结论： 1、建立了灵敏可靠的检测肝微粒体中蛇床