CAT为报告基因的铜绿假单胞菌启动子文库的建立及初步鉴定.pdfVIP

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2017-08-28 发布于安徽
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CAT为报告基因的铜绿假单胞菌启动子文库的建立及初步鉴定.pdf

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第卷第期生命科学研究 18 6 Vol．18 No．6 年月 2014 12 Life Science Research Dec. 2014 CAT 为报告基因的铜绿假单胞菌启动子文库的建立及初步鉴定 1 2 1 1 1 2 冯梦蝶洪愉许泽仰毛普加冯金赵继华 , , , , , , 2 2 1 1 1* 杨洪文宋武战黄芬井申荣曾韦锟 , , , , (1. 昆明理工大学医学院, 中国云南昆明650500; 2. 成都军区昆明总医院核医学科, 中国云南昆明650032) 摘要以为报告基因构建启动子探针载体从绿脓杆菌 : CAT (chloramphenicol acetyltransferase, CAT) , pCAT2 基因文库中筛选启动子。酶切铜绿假单胞菌的基因组回收片段并与载体连接 Sau3A Ⅰ , (500~1 500 bp) pCAT2 构建铜绿假单胞菌的基因组文库鉴定文库的多样性利用氯霉素和卡那霉素双抗 , PCR , (10 μg/mL) (50 μg/mL) 平板筛选了株阳性菌株并用、测序、比对进行鉴定。构建的基因文库的库容量可达个 16 , PCR NCBI 50 000 , 覆盖基因全长的倍插入率达具有较强的随机性。采用双抗平板进行启动子的筛选筛选效率高达 3.5 , 90%, , 。获得了绿脓杆菌基因组中的个启动子同源性达以上并对其活性进行初步鉴定为铜绿假单胞 96% 9 , 99% , , 菌基因