第1类整合子中aadA2基因翻译起始位点的确定.pdfVIP

生堡邀生塑堂塑鱼瘗堂苤壶!Q!!生!!旦笙!!鲞笠!!塑g地!』丛堡翌!趟!坐堡!!!!，旦!!!里!竺!!!!：!!!：!!：丛!．!! ．基础免疫学．’ 第1类整合子中aadA2基因翻译起始 位点的确定 魏取好 蒋晓飞 李敏 胡庆丰 吕火祥 周永列 吕元 【摘要】 目的确定第1类整合子中aadA2基因能否从上游无核糖体结合位点的密码子ATG 起始翻译并合成有功能的蛋白。方法定点突变含有不同翻译起始密码子的aadA2基因盒，并连同 上游的可变区启动子分别克隆入质粒pACYCl84中，转化大肠埃希菌JMl09，免疫印迹检测含有不同 翻译起始密码子的aadA2基因的翻译产物，用微量肉汤稀释法检测链霉素对含有不同翻译起始密码 子aadA2基因的大肠埃希菌JMl09的最小抑菌浓度。结果aadA2基因可从上游无核糖体结合位点 的密码子ATG及上游具有核糖体结合位点的密码子GTG起始翻译，同时在GTG密码子下游还存在 着起始翻译密码子，其翻译产物在免疫印迹中均可与抗氨基糖苷-3”一腺苷酰基转移酶多克隆抗体产生 特异性杂交条带，并赋予宿主细菌对链霉素不同水平的耐药。结论 当位于第1类整合子第1位基 因盒中，aadA2基因可从上游无核糖体结合位点的密码子ATG起始翻译并合成有功能的蛋白，这一 结构特点使得整合人第1类整合子的基因盒，不需带有核糖体结合位点即可起始基因盒中相应读码 框的翻译，从而有利于第1类整合子表达从外界环境中捕获的基因。 【关键词】 整合子；基因盒；耐药性；核糖体结合位点 aadA2in 1 thestartcodousof class Determining gene integron聊Q“一hao’，JIANG Xiao乒i，LI Ytmn．‘Centre Min，日u Huo—xiang，ZHOUYong-lie，￡u of Qing-feng，LU LaboratoryMedicine，Zhejiang Provincial People’SHospital。Hangzhou310014．China author：LU Medical CorrespondingYuan，DepartmentofLaboratoryMedicine，HuashanHospital，Shanghai College，FudanUniversity，Shanghai2删0，C^ina．Email：yuanlu@hsh．stn．sh．ca． TodeterminewhetheraadA2 canbetranslatedfrom山eA1IG 【Abstract】objective gene triplet， whichtherewasno ribosome site it．and afunctionalinclass plausible bindingprecedingsynthetized protein l integron．Methods wasusedtoconstructaadA2 cassettewithdifferent Site—specificmutagenesis gene start withtheir ofvariable were jnto COdons．togetherupstreamedpromoters regionsclonedplasmidpA— CYCl84 constructedwerethentransforedinto