简阳大耳羊链球菌的分离鉴定及药敏特性研究.pdfVIP

326 中国草食动物科学 2014年专辑 简阳大耳羊链球菌的分离鉴定及药敏特性研究 张素辉1．一，付利芝1．2，黄勇富：一，许国洋· (1．重庆市畜牧科学院，重庆402460；2．重庆市山羊工程技术研究中心，重庆402460；3．西南大学) 摘要：针对简阳某羊场患病羊只的病原茵进行分离培养，并对其进行分子生物学鉴定与耐药性分析。利用划 线接种的方法对病原茵进行分离纯化后，借助PCR技术扩增其16S rRNA，进行测序分析，构建系统发育进化 树，并对病原茵进行生化鉴定与药敏试验分析。通过序列分析发现，该病原茵与绵羊源链球茵(Streptococc琳 m／nor登陆编号为JQ726504)的同源性较高(99％)，并将其16SrRNA序列与马、牛、羊等来源的链球菌代表茵 株的序列构建系统进化发育树，发现其也与羊链球茵的序列聚在一起，药敏试验结果显示该茵对先锋必等17 种抗生素的敏感性较高，对洁霉素等7种抗生素具有一定抗性。研究表明，分离到的病原茵为山羊链球菌。 关键词：简阳大耳羊；链球茵；分离鉴定；药敏试验 链球菌是化脓性球菌的另外一种常见细菌．分布 PCRMaster 学院兽医所制备：2xTaq Mix,DNA抽提试 十分广泛，该类菌呈球形或卵圆形，直径0．6Ixm左右， 剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司；青霉素等20 多数呈链状排列。链球菌可分为仅型、B型溶血型和1型 种药敏纸片购自上海卫生技术服务公司生物试剂所： 3种，可以感染人和多种动物，并引起一定的病理变化。 琼脂糖凝胶回收试剂盒购自广州东盛生物科技有限公 但其抵抗力较弱．对一般的消毒剂和多种抗生素较为 司；16SrDNA的PCR扩增引物为通用引物。预期扩增片 敏感0-21。目前。关于猪的链球菌病报道的相对较多，而段大小为1．5kb左右．由大连宝生物工程有限公司合 关于山羊链球菌病的研究较少D1。羊链球菌病是由一种 溶血性革兰氏阳性链球菌引起的羊的急性传染病．患 病羊只常出现高热、咽喉炎、败血症等症状M。该病一 1．3病原茵的分离纯化 年四季均可发生，但冬春季节最为常见。气温偏低、青 对送检的大耳羊肺脏病变部位进行无菌划线接种 贮饲料供给不足、维生素缺乏等是该病的主要诱因161。 于小牛血清琼脂平板上。37℃恒温培养24。48h，观察 随着养殖业的发展．该病的发病对羊只的危害也日益 细菌的生长情况，并将分离的菌株进行纯化培养，纯化 显著，常与其他病原菌混合感染。给动物疾病的诊断与 后的菌株进行革兰氏染色镜检．同时将纯化后的菌株 防治带来一定的困难．给畜牧业和养殖户造成的损失 接种于血琼脂培养基，观察菌落生长情况。 也越来越严重17-8]。近年来，在重庆地区由链球菌引起的1．4药敏试验 羊只发病的情况较为常见．本试验对重庆丰都一简阳 参照美国临床实验室标准化委员会标准．采用纸 大耳羊羊场送检肺炎病例病羊进行细菌分离培养．通 片法做药敏试验，取200“L培养过夜的菌液涂布于小 h后测 过对分离菌生理生化特性、分子鉴定和药敏特性研究， 牛血清平板上，贴上药敏纸片，37℃恒温培养48 明确了该分离菌为链球菌．为进一步研究山羊链球菌 定抑菌圈直径。主要检测了该菌对青霉素等20种抗生 病的诊断与治疗奠定了基础。 素的敏感性．抑菌圈直径10mm表示其对抗生素具有 mill的为 1材料与方法 一定的耐药性。10～15rain的为中度敏感。15 1．1材料 高度敏感。 重庆丰都某羊场送检的简阳大耳羊肺炎病例肺脏