细菌斜面接种.docVIP

实验三 细菌的染色无菌材料的准备革兰氏染色简单染色夹膜染色1．革兰氏染色和个体形态观察 洁净无油载片，中央加一接种环水 无菌操作取菌，涂布均匀 干燥，固定（火上微热数次，不可过热） 2．简单染色 载片中央加一滴水→无菌操作取菌（枯草芽孢杆菌）→涂布→火上稍加热，干燥固定→草酸铵洁净紫染色2min→弃去，水洗涤→稍控水→擦干多余的水→加香柏油，镜检（油镜）。 3．夹膜染色 无菌操作取菌（胶质芽孢杆菌）→涂布→自然晾干→加冰乙酸结晶紫染色2min→弃去，用硫酸铜冲洗2次－马上加香柏油，镜检； 4、加压蒸气灭菌（要求每人至少单独操作灭菌锅一次） 锅体加水至支架上沿 放入料桶，料桶中装料 （料桶放入锅中时，注意料桶的排气槽放在右手一侧）； 锅体密封 打开排气阀，加热排气（开始是断断续续排气，随后连续排热气，需连续排热气5min） 关闭排气阀，继续加热，温度压力进一步上升 加压至1.05kg/cm2（121℃） 调节火焰大小，维持121℃，20min 关闭煤气灶，自然冷却 待压力表到零后打开排气阀门 打开灭菌锅，取出物料 5、斜面接种（大肠杆菌） 先取金葡菌，水滴中涂布3－5圈； 再取克雷伯菌，水滴中涂布数十圈，保证均匀。 （*金葡菌不易涂布均匀，要反复涂布） 把锅体上盖的排气管插入料桶的排气管中，盖上上盖； 把六个螺旋全部轻轻拧上，再对角线两个两个全部拧紧。 湿室放柜子中； 斜面需先稍冷却至70℃后，再倾斜放置，斜面长度略小于或者等于试管长度的一半。充分凝固后再收入柜子中。 下降载物台，取下载玻片； 取一片洁净擦镜纸，擦去镜头上香柏油； 再取一擦镜纸，吸少量清洁剂，擦去残余油迹； 再用一片擦镜纸擦去残余清洁剂； 最后用一片清洁擦镜纸检查，确认无油污。 放回显微镜，登记显微镜编号、使用者和使用时间 关闭电源，将电源线绑好 将4倍镜头转至工作位置 提升镜头或者降低载物台聚光器降至最低位置 油镜保养 细调至物像清晰，选取视野 缓慢粗调至刚出现物像（提升镜头或者降低载物台） 油镜头浸入香柏油中，转动粗校准螺旋，使镜头与玻片相切 镜下的载玻片处滴加1滴香柏油 聚光上升至最高，可变光栅开到最大 转换油镜到工作位置 低倍镜下寻找合适的视野 染色细菌涂片于载物台 初染 加草酸铵结晶，染色1－2min，弃去，水洗，稍控水； 媒染 加路德尔碘液，染色1－2min，弃去，水洗，稍控水； 脱色 加95%乙醇，马上轻摇数次，弃去，重复1次，马上水洗，稍控水； 复染 加沙黄染色2－3min，弃去后水洗，稍控水后用毛边纸擦水。 染色 24小时后（可以根据需要1周后）看结果 接种完的试管（斜面）置于37℃培养 杀灭环上残菌 接种（自试管底部开始做“Z”字型致密划线） 接种环挑取少量菌苔，迅速插入菌种管 接种环迅速插入菌种管，在管底部培养基厚处冷却 拔去试管帽，试管口过火 塞上试管帽 菌种管在食指，中指间 待接斜面在中指和无名指间 灼烧接种环，丝和金属棒过火 贴好标签 手持试管（斜面）