光合细菌菌株产类胡萝卜素培养基优化.docVIP

第４１卷　第１期 ２０１３年１月 河南师范大学学报（自然科学版） Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｎａｎ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （ Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ ） 　 Ｖｏｌ．４１　Ｎｏ．１ 　 Ｊａｎ．２０１３ 　　 文章编号： １０００－２３６７ （ ２０１３ ） ０１－０１４２－０４ 光合细菌 ３ 号菌株产类胡萝卜素培养基优化 李彦芹，吴玲玉，吴 　 帆，陈 　 娜，李春青，康现江 （河北大学 生命科学学院，河北 保定 ０７１００２ ） 摘 　 要：探讨了光合细菌 ３ 号菌株产类胡萝卜素培养基的优化以及类胡萝卜素的提取 ． 首先对 ３ 号菌株的 ６０％ 蔗糖悬液进行全波长扫描，确定了 ３ 号菌株在 ４５７ｎｍ 波长下出现最大吸收峰，因此用 ４５７ｎｍ 波长下的 ＯＤ 值 作为类胡萝卜素相对含量高低的指标 ． 通过改变培养基碳源、氮源和盐度确定最佳的碳源、氮源和盐度，得出最优碳 源为蔗糖，最优氮源为硝酸铵，最适盐度为 ０．１‰． 利用最佳培养基培养 ３ 号菌株，用皂化法分离纯化类胡萝卜素，得 类胡萝卜素纯品，提取率为 ３０．０６ｍｇ · ｇ －１ ． 关键词：光合细菌；培养基优化；类胡萝卜素；提取率 中图分类号： Ｑ９３９．９ 文献标志码： Ａ 光合细菌（ Ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ ， ＰＳＢ ）是一类以光作为能源、能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用 自然界中的有机物、硫化物、氨等作为供氢体，进行光合作用的微生物 ［ １ ］ ． 其菌体本身无毒、无污染、营养丰 富，细胞干物质中蛋白质含量高达 ６０％ 以上，其蛋白质氨基酸全面，维生素含量丰富，同时还含有大量的类 胡萝卜素、辅酶 Ｑ 等生理活性物质 ［ ２ ］ ． 类胡萝卜素作为一种功能性色素，它在被用作食品和化妆品添加剂的同时，又受到医学界的广泛瞩目 ． 光合细菌富含各种类胡萝卜素，可以大量培养，易于提取，是一种非常有前途的类胡萝卜素供体 ． 另外，光合 细菌菌体蛋白又可作为饲料或菌肥加以综合利用 ［ ３ ］ ． 本文通过对光合细菌 ３ 号菌株培养基进行优化，用优化 后的培养基培养 ３ 号菌株，提取类胡萝卜素，计算提取率，以期对实际生产中光合细菌的培养和类胡萝卜素 的大量生产提供一些参考和借鉴 ． １　 材料与方法 １．１　 菌 　 种 微生物学实验室分离保藏的光合细菌 ３ 号菌株 ． １．２　 培养基 １ 号培养基：酵母膏 １０．０ｇ ， ＭｇＳＯ ４ · ７Ｈ ２ Ｏ　０．５ｇ ， Ｋ ２ ＨＰＯ ４ １．０ｇ ，琼脂 ２０．０ｇ ，蒸馏水 １　０００ｍＬ ， ｐＨ ７．０～７．２ ， １２１℃ 灭菌 ２０ｍｉｎ． ２ 号培养基： ＮａＮＯ ３ ２．０ｇ ， ＣＨ ３ ＣＯＯＮａ　１．０ｇ ， ＭｇＳＯ ４ · ７Ｈ ２ Ｏ　０．１５ｇ ， Ｋ ２ ＨＰＯ ４ ０．２ｇ ， ＮａＣｌ　１．０ｇ ，酵母 膏 １．０ｇ ，无机盐类溶液 １０．０ｍＬ ，蒸馏水 １　０００ｍＬ ， ｐＨ　６．５ ， １２１℃ 灭菌 ２０ｍｉｎ． 无机盐类溶液的配制： ＦｅＣｌ ３ · ６Ｈ ２ Ｏ　５．０ｍｇ ， ＣｕＳＯ ４ · ５Ｈ ２ Ｏ　０．０５ｍｇ ， Ｈ ３ ＢＯ ３ １．０ｍｇ ， ＭｎＣｌ ２ · ４Ｈ ２ Ｏ ０．０５ｍｇ ， ＺｎＳＯ ４ · ７Ｈ ２ Ｏ　１．０ｍｇ ，蒸馏水 １　０００ｍＬ． １．３　 活菌体吸收光谱测定 光照厌氧培养物离心，生理盐水洗涤，悬浮于 ６００ｇ · Ｌ －１ 的蔗糖溶液中，用紫外可见分光光度计在 １９０～１　１００ｎｍ 波长范围内扫描，记录其光吸收峰值 ［ ４ ］ ． 收稿日期： ２０１２－０７－３０ 基金项目：河北省自然科学基金（ Ｃ２０１１２０１０２８ ） 作者简介：李彦芹（ １９６５－ ），女，河北满城人，河北大学副教授，主要从事微生物学和免疫学方向研究 ．１．４　 培养基优化 表 １　 单因子优化表 碳源／（ １．０ｇ · Ｌ －１ ） 氮源／（ ２．０ｇ · Ｌ －１ ） 盐度／ ‰ Ｎａ ２ ＣＯ ３ ＮＨ ４ ＮＯ ３ ０．１ ＣＨ ３ ＣＯＯＮａ　 ＮａＮＯ ３ ０．５ 柠檬酸钠 尿素 １．０ 葡萄糖 谷氨酸 １．５ 蔗糖 ＮＨ ４ Ｃｌ　 ０．２ １．４．１　 单因子优化 　 采用 ２ 号液体培养基培养 ３ 号 菌株，分别改变培养基的碳源，氮源及盐度（见表 １ ）， 其他成分保持不变，接种量为 １０％ ，每组 ３ 个平行， ３０℃ ， ２　０００Ｌｕｘ 厌氧培养 ６ｄ ，测定 ＯＤ４５７ ，确定 ３ 号菌株 产 类 胡 萝 卜 素 的 最 优 碳 源、氮 源 及 最 适 盐度 ． １．４．２　 正交优化 选取最优碳源、氮源、 Ｍｇ ２＋ 的浓度及盐度四因素五水平设计正交试验，接