不同生境鱼类HIF1α基因的克隆和差异性研究.pdfVIP

MOLECULAR CLONING AND DIFFERENCE ANALYSES OFHIF-1d GENE 1N DIFFERENT HABITATSOF FISH A Dissertation Submittedto theGraduate Schoolof Henan Normal University inPartial Fulfillmentofthe Requirements ofMasterofScience fortheDegree By 而愕Yanna Supervisor：Prof．Kong Xianghui May,2012 麟 —址。悖th岫 嚼辩蚍雌 摘要 缺氧可引起细胞产生一系列的代偿性变化，如呼l及量增加．HIF．1感受调节性加强、 化，对于理解分子序列变异和低氧适应之间的相关性具有重要的意义，也可为培育和筛 选酣低氧鱼类品种提供理论依据。 本研究采用分子生物学方法，选择不同生境代表性鱼类为研究对象，对所选鱼类 银鲫(Cassius asottts)、 泥鳅(Paramis gurnus)，从其心脏、肝脏、肾脏、腮、肌肉中提取总RNA为模扳，用 的保守性序列，设计和筛选一对特异性引物(上游引物加入Hind盯酶切位点，下游引 物加入Xbo，酶切位点)扩增出银鲫．淇河鲫、鲶鱼、泥鳅的艘一血的编码序列。 19-T Vector克隆载体中，转化大肠杆菌 将H1F-I序列经TA连接插入到pMDSimple JMl09，获得重组的pMD 筛选出阳性克隆，用HindIII和NotI酶切鉴定重组质粒。经测序以及同源寄列的比对， 以验证所获得的鱼类HIF—ln eDNA序列。其研究结果如下； 高的核酸序列一致性达到95％，其次是鲤鱼(Cyprinuscarpio)95％，青海湖裸鲤 molitrix)91％，团头鲂 (Gymnocyprisprzewalskii)93％．白鲢(Hypophthalmichthys