实时定量PCR技术应用.pdfVIP

TaqMan® 试剂盒大家族 Everything you need for quantitative gene expression measurement 1. 新TaqMan® microRNA 试剂盒系列 2005年秋季正式推出 2. Taqman 药物代谢相关基因SNP分型试剂 盒 3. TaqMan® 基因表达分析试剂盒 4. TaqMan® 低密度基因芯片(micro fluidic card) 5. TaqMan® 管家基因内对照分析样本 6. 代客合成TaqMan® 基因表达分析试剂盒 7. 代客合成TaqMan® 荧光探针 TaqMan® microRNA定量 分析试剂盒 用实时荧光定量PCR方法和 TaqMan®试剂盒来定量分析 成熟的小RNA: microRNAs *Mature miRNAs are the miRNA biologically active form Precursor 什么是miRNAs MicroRNAs 是一种内源性长度在２２个碱基左右 的RNA分子，它在动植物中具有重要的基因调控作 用，它们通过与mRNAs结合抑制翻译或造成 mRNAs 被酶解切割而起作用　 目前在各种生命体中发现的miRNAs类型共有约 700种以上,通过实验验证或经数据库和软件推测 其中人源的约有２００种　 高丰度存在：平均每个细胞中约有50,000个拷贝 为什么miRNAs非常重要? MicroRNAs 是一类新的基因调控因子　 某些miRNAs控制了动植物的发育　 理解miRNA 的功能将帮助现在流行的siRNA 实验结果：RNA干扰／基因沉默 MicroRNAs 有可能成为新型的疾病标志物 MicroRNAs 可能具有重要临床应用价值 现有的miRNA检测方法 克隆法Cloning 杂交法Northern Blot Ribonuclease Protection-based PAGE电泳法 基因芯片法Microarray-based miRNA profiling 上列各种方法均未被证实是有效，准确并且是高度重 现的：不少小RNA间只有一个碱基的不同 TaqMan® MicroRNA 分析方法 发夹状引物的反转录荧光定量PCR miRNA Oligos required per miRNA Step 1: 1. Specific RT primer Stem-loop RT 2. Specific forward primer 3. Specific reverse primer 4. Specific TaqMan® probe Enzymes required Step 2: 1. Reverse transcriptase Real-time PCR 2. AmpliTaq Gold® DNA Polymerase Q F MicroRNA 定量方法 • Estimated synthetic mi