实时荧光定量PCR技术及在昆虫学与研究中应用.pdfVIP

昆虫 学 报 ActaEntomologicaSinica，December2008，51(12)：1293—1303 实时荧光定量 PCR技术及其在昆虫学研究中的应用 王光华 ，赵伟春 ，程家安 ’ (1．浙江大学昆虫科学研究所，杭州 310029；2．浙江中医药大学生物工程学院，杭州 310053) 摘要 ：实时荧光定量 PCR(real—timefluorescentquantitativepolymerasechainreaction，FQ—PCR)是一种利用荧光信号实时 监测体外DNA分子PCR复制过程中每个循环的扩增产物，从而实现对 DNA模板进行定量分析的技术，具有准确、 快速、灵敏 、特异等优点，在动植物基因工程 、动植物检疫、微生物鉴定与分类、食品安全检测和医学等领域中得到 广泛应用。本文对实时荧光定量PCR技术的原理、优缺点及近年来新的荧光探针的原理、类型进行了评述 ，并对实 时荧光定量 PCR技术在 昆虫学研究中的应用进行 了综述。 关键词：DNA；实时荧光定量PCR；荧光共振能量转移 ；探针；昆虫学 中图分类号：Q966 文献标识码 ：A 文章编号：0454—6296(2008)12．1293．11 Real-time fluorescent quantitative PCR technique and itsapplicationsin entomologicalstudies WANG Guang—Hua，ZHAO Wei—Chun，CHENG Jia—An ，(1．InstituteofInsectSciences，Zhejiang University，Hangzhou310029，China；2．CollegeofBioengineering，ZhejiangChineseMedicalUniversity， Hangzhou310053，China) Abstract：Real—timefluorescentquantitativePCR isalaboratorytechniqueforquantitativemeasurementofthe DNA templateconcentration bymonitoringthefluorescentsignalineach ofDNA amplificationcycle．This technique is accurate， speedy， sensitive and specific． h has been widely used in such fields as bioengineering，quarantine，microbe identification and classification，food safety inspection and medical science．Inthisarticle，theprinciples，characteristicsandrecentadvancesinfluorescentprobesofthereal- timefluorescentquantitativePCR assay，and itsapplicationsinentomologicalstudieswerereviewed． Keywords：DNA；real—timefluorescentquantitativePCR(FQ·PCR)；fluorescenceresonanceenergytransfer (FRET)；probe；entomoloyg 实 时 荧 光 定 量 PCR (real—time fluorescent 变分析等方面的研究。本文对实时荧光定量 PCR quantitativepolymerasechainreaction，FQ—PCR)是在 技术的原理 、优缺点及近年来新 的荧光探针 的原理 PCR技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定 和类型进行了评述 ，并对实时荧光定量 PCR技术在 量技术，Higuchi等 (1992)提 出了实时 PCR的设想 ， 昆虫基础生物学 、分类 、检疫 、种群生态 、抗药性和生 1996年美 国AppliedBiosyste