流感病毒在MDCK细胞中培养的条件优化.pdfVIP

· 国际检验医学杂志2014年1月第35卷第1期 IntJLabMed,January2014,Vo1．35,No．1 92 · — — · 经验交流 · 流感病毒在 MDCK细胞中培养的条件优化 余钧池，陈柳军 (广西柳州市疾病预防控制 中心 545007) 摘 要：目的 探讨流感病毒在 MDCK细胞中的最佳培养条件。方法 将流感病毒以吸附法和直接接种法接种在MDCK 细胞上，比较接种效果；选择最佳病毒接种方案，分别通过调整细胞培养时间、培养温度、病毒生长液胎牛血清浓度、胰酶浓度、病 毒接种量和染毒传代次数来优化选择最佳培养条件。结果 直接接种法的培养效率较高；流感病毒在MDCK细胞中培养的最佳 收获时间为96h；最佳培养温度为35．5。C；胎牛血清对病毒的增殖有明显的抑制作用；病毒生长液含有终浓度为2．5~／g／mL的胰 酶可提高病毒血凝效价；用于流感病毒培养的MDCK细胞的传代次数不宜超过 4代。结论 流感病毒在MDCK细胞中最佳培养 条件是：在病毒生长液环境下直接接种流感病毒，放置 35．5℃、5 CO 培养箱培养 96h后收获。其中病毒生长液中无胎牛血 清、胰酶终浓度为 2．5gg／mL。 关键词 ：流感病毒 ； 细胞 ，培养 的； 实验室技术和方法 IN)I：1O．3969／j．issn．1673—4130．2014．01．038 文献标识码 ：B 文章编号：1673—4130(2014)01-0092—03 流感是全世界最严重的呼吸道传染病之一，其发病率和病 获，收获之前将细胞放于一8O℃冰箱 ，冻融 1～2次，按 《国家 死率极高I】]。流感病毒的分离与鉴定是当今诊断和研究流感 流感 中心标准操作规程 (修订版)》进行流感病毒 的血凝 (HA) 的主要手段[。利用MDCK细胞培养、增殖和分离流感病毒 滴度检测 。 的方法已广泛地应用于流感病毒研究、监测及疫苗生产等工 1．5 流感病毒在 MDCK细胞上最佳培养时间的选择 将接 作 ，使用 MDCK细胞分离得到的流感病毒 ，抗原性和基因特性 种 了流感病毒 的 MCDK细胞 ，分别放置于 34．0、34．5、35．0、 比鸡胚分离得到的病毒更接近于原始采集标本 口]。因此，运用 35．5、36、36．5、37．0。C，5 CO2培养箱中培养 96h，收获后测 MDCK细胞分离流感病毒是我国流感监测 网络实验室检测流 定病毒的HA滴度 。 感病毒的主要手段之一。本文通过比较不同培养条件下，使用 1．6 胎牛血清对 MDCK细胞培养流感病毒 的影响 将培养 MDCK细胞培养流感病毒的效果，以摸索出流感病毒在本实 好的MCDK细胞涤 3次后 ，接种流感病毒 。病毒生长液 中分 验室MDCK细胞上的最佳分离培养条件。 别含有为 ：0．0 、1．25 、2．5 、5．0 、10．0 、20．0 的胎牛 1 材料与方法 血清和终浓度为 2．5,／g／mL的胰酶，放置于35．5℃、5 CO 1．1 细胞和病毒 MDCK细胞 由广西 自治区疾病预防控制 培养箱培养 96h，收获后测定病毒的HA滴度 。 中心病毒所惠赠，为第 12代；A1代表季节性流感 HIN1；A2 1．7 胰酶对 MDCK细胞培养流感病毒的影响 将培养好 的 代表季节性流感 H3N2；A3代表 甲型 HIN1；B代表 B型(Vic— MCDK细胞涤 3次后 ，接种流感病毒。病毒生长液中胰酶终 toria)。实验过程中使用的病毒株，均为本实验室分离鉴定得 浓度分别 为：0．0、1．25、2．5、5．0、10．0、20．0~／g／mL，放置 于 到，经国家流感中心或广西 自治区疾病预防控制中心病毒所鉴 35．5℃、5 COz培养箱培养 96h，收获后测定病毒的 HA滴 定确认 。