胡静涛-猪源A组轮状病毒重组质粒pW425et-Vp7在乳酸菌中表达及免疫原性分析.pdfVIP

微生物学报Acta Sinica Microbiologica 瓿黝。貔一貔。躺。。磁。。缎；瓣。瓣；渤燃黼；。渤。貉燃。一燃貔锄Research，Paper 2008 48(11)：1514-1519；4November ISSN OOOl一6209；CNll-1995／Q hup：ajournals．im．ac．cn 猪源A组轮状病毒重组质粒pW425et．Vp7在乳 酸菌中的表达及免疫原性分析 胡静涛，王春风4 (吉林农业大学动物科学技术学院，长春130118) 摘要：【目的】在乳酸菌中表达猪源A组轮状病毒重组质粒pW425et-Vp7，并检测其抗原性，为进 一步制备猪轮状病毒乳酸菌疫苗奠定基础。【方法】摸索电转化条件，将已构建的重组质粒 blot检测其表达情况。并将BALB／c小鼠口服免疫该重组菌，间接ELISA检测其免疫原性。另外， 给免疫后小鼠攻以纯化的猪轮状病毒(蛋白含量15 mg／mL)，初步检测该重组菌的免疫保护作用。 【结果】Vp7基因在乳酸菌中获得表达，大小约40．77kDa，且该蛋白可与猪轮状病毒抗体反应，具 有反应原性。ELISA检测小鼠肠黏膜样品结果显示免疫后小鼠能产生明显的抗轮状病毒SIgA抗体， 表明该重组菌具有较好的免疫原性。且攻毒后，免疫组仅23％的小鼠发生腹泻，初步证明该重组菌 对猪轮状病毒的攻击具有较好的保护作用。【结论】在乳酸菌中成功地表达了猪轮状病毒Vp7基因， 制备了猪轮状病毒Vp7重组乳酸菌，该重组菌具有较好的抗原性，初步证明其作为疫苗的可行性。 关键词：猪轮状病毒；电转化；乳酸菌；表达；免疫原性 中图分类号：R37 文献标识码：A 文章编号：0001．6209(2008)11—1514．06 乳酸菌作为动物肠道内正常存在的益生菌具有许 成员之一的乳酸杆菌是保护性抗原基因或免疫调节因子 多益生功效，以其作为表达外源保护性抗原基因的受体 良好的转化或表达系统，以其作为载体表达内源或外源 菌株，就可以将乳酸菌的生物学功能和外源功能抗原基 蛋白，在功能食品、医疗保健等领域具有诱人的前景【3】。 因的特异性免疫相结合【l】。鉴于猪轮状病毒(Porcine本研究对电穿孔条件进行摸索和优化后，将已构 Rotavirus，PRV)对养猪业的严重危害，采用基因工程和 分子生物学手段研制基因工程乳酸菌，在防治消化道疾 陷型的嗜酸乳杆菌中，经生长功能弥补筛选阳性克 病中的应用潜能是不可估量的。乳酸菌具有使动物肠道 隆【4·51，通过SDS．PAGE和Westernblot分析检测在 黏膜底层细胞增加，使免疫细胞吞噬功能增强，加强宿 乳酸菌中的表达情况。将获得表达的重组菌口服免疫 主肠粘膜免疫，诱导SIgA分泌而增强肠道免疫屏障等作 用【2】。利用一些乳酸菌可在胃肠道、泌尿、生殖系统中 特异性抗体。并对免疫的小鼠攻以猪轮状病毒，初步 黏附存活且抑制病原微生物等特点，开展乳酸菌作为活 检测其免疫保护力，为进一步研制绿色环保型猪轮状 菌口服疫苗载体的研究受到了广泛的重视。作为乳酸菌 病毒基因工程乳酸菌疫苗奠定基础。 项目 ‘通讯作者。Tel／Fax：+86．431E-mail：wangchunfeng@jlau．edu．err 收稿日期：2008．04．10；修回日期：2008-08·17 万方数据 胡静涛等：猪源A组轮状病毒重组质粒pW425et．Vp7在乳酸菌中的表达及免疫原性分析．，微牛物学报(2008)48(11) mmol／L 1材料和方法 培养至OD600为0．6—0．8，在培养基中添加40