动物转基因技术及其应用.pdfVIP

摘要：动物转基因技术从 1981年首次在小鼠上应用成功以来，已相继应用到多种动物。转基因技术现已成 为研究基因功能，治疗疾病的有力工具。本文对动物转基因技术做一简要的概述。 关键词 ：转基 因 动物 畜牧 将外源性基因用实验方法插入动物生殖细胞 段用连接酶接入载体，并建成载体克隆。把理想基 的基因组而获得具有插入基因特性，并能遗传给 因载体放人大肠杆菌等宿主细胞中扩大 、增殖， 后代的动物称为转基因动物ftransgenicanimals)。 或采用PCR的方法扩增 。再对扩增的DNA片断 1981年第一次成功地将外源基因导入动物胚胎， 进行适当修饰，然后进行转移，或将特定的控制 创立了转基因的动物技术。1982年获得转基因 序列连接到 目的基因的结构序列上，从而创造 1 小 鼠。以后相继在 l0年间报道过转基因兔 、绵 个新的重组基因，然后再进行转移。 羊、猪、鱼、昆虫、牛、鸡、山羊、大鼠等转基 2．2载体 因动物的成功。转基因动物已成为探讨基因调控 1993年，几个不同的科研小组相继报道 了用 机理 、致癌基因作用和免疫系统反应的有力工 酵母人工染色体 (YACs)做载体将外源基因倒 具。同时人类遗传病的转基因动物模型的建立 ， 入小鼠体内获得转基因小鼠。转入基因的表达水 为遗传病的基因治疗打下坚实的理论和实验基 平与导入后它在宿主基因组内的位置无关。此 础。本文对 目前应用于动物转基因的相关技术及 后，其他研究小组也发现用酵母人工染色体转基 其现状、前景做一介绍。 因具有位点独立和倒入基因分别表达的优点。为 1．转基因技术的定义 了确保转入基因的保真表达，用酵母人工染色体 人工分离和修饰过的基因导人到生物体基因 作为载体将外源基因导人小鼠核内获得成功。此 组中，由于导入基因的表达 ，引起生物体的性状 技术很快应用于家禽中，相继地用酵母人工染色 的可遗传的修饰 ，这一技术称之为转基因技术。 体作为外源基因的载体成功获得了转基因兔、猪 人们常说的 遗“传工程”、 “基因工程”、 “遗传 和其他哺乳动物。用细菌人工染色体 ／P1一人工 转化”均为转基因的同义词。经转基因技术修饰 染色体 (BACs／PACs)也成功获得转基因动物。 的生物体在媒体上常被称为 “遗传修饰过的生物 利用 YACS，BACs，PACs载体转基因已发现了 体 ” (Genetically modified organism， 简 称 新基因，确定了基因位点内关键的调控序列和设 GM0)。 。 计与人类疾病相关的动物模型。用人工染色体转 2．动物转基因的材料的获得 基因已成功应用于生物 、医学和生物技术领域 ， 2．1基因的获得 使转基因技术产生一个重大突破。 取 自现有的生物体的 DNA，制 内切酶或外 2．3基因转移的受体细胞的制备 切酶把DNA切割成若干小段，然后再把这些小 研究转基因动物的制备，首先要考虑用何种 2010年第1期 {I8 转基因受体细胞。选择合适的受体细胞和可行的 行破膜处理，再与外源基因共孵育 lmin，然后将 基因导人途径，是该技术成功的前提 。基因转移 精子头部显微注射人 MⅡ期的小鼠卵母细胞，获 的受体细胞必须是全能细胞 ，全能细胞随着细胞 得成功。该项研究揭示 ，精子膜破损后外源 分化、胚胎发育，可以把其中的基因组贮存的全 DNA穿过外膜吸附于内膜 ，更有利于转基因动 部遗传信息扩大到生物体所有的细胞中，此以外 物的产生。 至少是多能细胞。 3．4胚胎干细胞介导法 2．4实验动物的准备 胚胎干细胞 (Es)是早期胚胎经体外分化抑 分别制备不育雄性动物、假孕雌性个体、取 制培养建立的多能性细胞系，在滋养层或条件培 受精卵的雌性个体、与卵供体母畜交配的正常公 养基中具有无限增值能力。从胚泡期胚胎 内的细 畜，以不同动物作