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彩虹明樱蛤同工酶组织特异性研究 1 1，3 2 1,3 1 1 2 3 李晓英,董志国 ,王美珍,金 武 , 赵金鑫, 阎斌伦,陈汉春,李家乐 （1.淮海工学院 江苏省海洋生物技术重点实验室,江苏 连云港222005; 2.溪市水产研究所，浙江 慈溪 315300 ；3.上海海洋大学 水产与生命学院，上海 200090 ） 摘要：采用聚丙烯凝胶垂直电泳技术和同工酶特异性染色方法，对彩虹明樱蛤（Moerella iridescens ）的斧 足、肝胰腺和外套膜 3 种组织的酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)和超氧化物歧化酶(SOD)3 种同工酶进行 了分析。结果表明，这 3 种酶在上述 3 种组织中均得到了表达,不同的酶既存在一定的组织特异性又有相 似性的特点。EST 在 3 种组织中分别产生 7 ～8 条酶带，分为 4 个带区，其中 EST-3 和 EST-6 在 3 种组织 中均为保守存在的强带，而斧足中缺失EST-1 、EST-8 和 EST-9 ，肝胰腺中缺失EST-1 和 EST-2 ，外套膜中 缺失 EST-2 和 EST-8；MDH 在 3 种组织中有 4 ～5 条酶带，MDH-2 在斧足中缺失，MDH-3 在外套膜中缺 失,而处于 s-MDH 的 MDH-4 和 MDH-5 在 3 种组织中保守存在。SOD 在 3 种组织中共表现为 4 条酶带， 酶谱无明显变化，组织间无明显差异，这一特殊性可以用其作为生化遗传标记对彩虹明樱蛤进行种质鉴定。 关键词：同工酶；电泳；彩虹明樱蛤（Moerella iridescens ）；组织差异性 中图分类号 Q789 ，S917 文献标识码 A 文章编号：1000-3069 （2009 ）01-0043-05 彩虹明樱蛤（Moerella iridescens ）隶属于樱蛤 明樱蛤。选用个体无损伤，喷水有力的健康的蛤200 科(Tellinidae)，俗称梅蛤、扁蛤、海瓜子等。该贝 个，壳长为2.24 cm ± 0.39 cm,小心洗刷去除表面附 分布于太平洋西岸及大洋洲北岸，我国南北沿海均 着物，暂养于事先准备好的经充分曝气的实验室水 有发现，尤以浙江、福建沿海产量最大，是一种重 族箱内。 要的滩涂养殖贝类。近年来，由于彩虹明樱蛤的生 1.2 同工酶提取 存空间锐减、资源区掠夺性的酷捕滥采，使得彩虹 试验用蛤于实验室水族箱内暂养一周，使其吐 明樱蛤的资源遭到破坏。了解其生物学特性，开展 尽泥沙，取20 个样本活体解剖，为消除个体差异， 人工增养殖，培育优良品种是彩虹明樱蛤产业发展 所有样本的斧足、肝胰腺、外套膜3 种组织中同种 的重要方向。目前有关学者对彩虹明樱蛤的养殖生 组织混合研磨制备酶液。电子天平称质量，以组织 [1，2] [3，4] [5] 态学 ，繁殖生物学 和呼吸代谢 进行了研 质量和酶提取液的体积比 1:3 加入酶提取液（0.1 究，而对彩虹明樱蛤的种质鉴定研究仅见形态学鉴 mol/L Tris-HCl, 0.6%巯基乙醇pH 8.0 ），在预冷的玻 定[6]，而更深入的生化及分子鉴定还未有报道，应 璃研钵内低温研磨，加入少许石英砂和一定量的液 用同工酶电泳技术在生化水平上进行种质鉴定和 氮，13 000 r/min 低温离心2 次，每次30 min，取 群体遗传结构分析，对于彩虹明樱蛤的种质标准的 上清液－70℃保存备用。 制定和种质资源评价具有重要的意义，且该技术在 1.3 电泳及染色 贝类研究中取得了良好的应用研究结果[7~9] 。本工 采用北京六一仪器厂生产的稳压稳流型电泳 作采用不连续聚丙烯凝胶电泳法，研究彩虹明樱蛤 仪进行不连续聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳。3 种酶 同工酶的组织特异性，目的是为进一步研究彩虹明 所用浓缩胶含量均为2.5% ，使用0.5 mol/L Tris-HCl 樱蛤生化遗传和种质鉴定以及种质标准的制定提 供科学依据。