3.24A23187诱导来源于急性髓细胞白血病树突状细胞实验研究.pdf

A231 87诱导来源于急性髓细胞白血病 树突状细胞的实验研究 硕士研究生：李伟平 指导教师：宋振岚 教授 专业名称：内科学 摘 要 背景及目的：急性髓细胞白血病(AML)经传统化疗达完全缓解 后体内仍残留有108～109个白血病细胞，尽管反复强化治疗，体内仍有 微小残留病变(MRD)的存在而成为白血病复发的根源。最大限度的 杀灭残留白血病细胞是防止复发，延长缓解期和无病生存期的关键。 树突状细胞(DC)在免疫反应中起关键的免疫调节作用，可以激活初 始型及静息T淋巴细胞，是免疫反应的始动者，可以诱导抗原特异的 细胞毒性T细胞(CTL)产生。其独特的功能在肿瘤免疫中备受关注，DC 自然成为我们研究的靶点之一。最常用的体外诱导树突状细胞的方法 体外诱导生成DC一般需要7～14天，时间较长，细胞因子用量较大， 价格昂贵，存在污染的可能性。国外曾有钙离子载体可以诱导CD34+ 造血干、祖细胞，外周血单个核细胞快速生成DC的零星报道。本试 验旨在探讨利用单一的试剂——一种钙离子载体A23187，将不同亚 型的AML细胞在体外诱导转化为DC，并比较钙离子载体与常规的细 培养DC提供快速、简便、易行、稳定的新途径。 免疫缺陷，可以递呈所有公认的白血病特异性抗原，因此最大限度的 产生白血病特异性CTL，为临床彻底清除AML的微小残留病变(MRD) ·1‘ 提供一条新途径，也为AML自体于细胞移植提供一种行之有效的体外 净化方法。 方法：用密度梯度比重离心法分离8例初发的AML患者骨髓单个 核细胞，以每孔1×106个细胞在24孑L板内液态培养，共分3组培养， 液)；CK组：GM-CSF+][L一4加入完全培养液；对照组仅含完全培养液。 培养4天，倒置显微镜及细胞化学染色观察细胞形态变化，流式细胞 变化；混合淋巴细胞反应采用MTT比色法测定DC刺激同种异体T淋 活的T细胞的杀伤自身白血病细胞活性的异同。 结果：1．培养四天后，CI组和CK组细胞有相似的变化，细胞体 积变大，形态由圆形变为不规则形，细胞周围出现树突状伪足。 cI 诱导组与CK组相比，细胞体积更大，细胞周围树枝状突起更明显。 CI组出现上述变化的细胞占30％～60％左右，而CK组不足30％，对照 组细胞生长缓慢，且形态变化不大，未见树突样细胞出现。 表达明显上调，CDl4表达下调。DC成熟特异性标记CD83在CI组明 显上调，但是CK组CD83无变化。 3．A23187诱导的DC对同种异体T淋巴细胞刺激作用远高于CK组及 对照组，且随DC细胞数量的增加刺激T淋巴细胞增殖的活性增强。 抗自身白血病的活性明显增强。当效靶比例为50：1时，A23187诱导 的AML．DC激活的T细胞与IL，2激活的T细胞其抗自身白血病的活 性有明显的差异(P0．05)。 结论：1．利用单一试剂钙离子载体A23187，体外可以将AML细胞 诱导转化为形态、表型和功能上符合DC特征的细胞。 2．cI组诱导AML细胞4天内即可生成DC，且生成DC高表达成 细胞低表达。 ·々’ 明显增强。 关键词：钙离子载体 树突状细胞 白血病 微小残留病 ·3· A23 187induces of dendriticcell acquisition characteristicsin acute leukemia myeloid myeloid cells progenitor