3.24Re-LytA滴鼻免疫诱导BALB%2fc小鼠产生抗肺炎链球菌感染实验研究.pdfVIP

堇堑塞墼圭生照堡塞 Re-LytA滴鼻诱导BA毛B／￡小鼠产生抗 肺炎链球菌感染免疫的实验研究 学位申请人：甘慧泉 导师：吴忠道教授 中山大学基础医学院病原生物学部 摘要 臃炎链球蓥(Streptococcuspneumoniae，spn)是藏胁人类健壤疑主要瘸 原菌之一，可引起大叶性肺炎、副鼻窦炎、脑膜炎、中耳炎和心内膜炎等疾病。 近年来由于肺炎链球菌耐药菌株的不断出现，所致感染仍怒人类致病和死亡的主 要鼹陵之一，因姥急簧发浸凝憋抗萤药物及疫萤。嚣蔻熬漆使用夔人爱摭感染疫 苗为多糖疫苗和多糖蛋白复合凝苗，具有肯定的保护效果，但都备有其局限性。 研制歼发新的更具优势的疫菌，已经藏为曼伽性疾病防治的实际需要。 蠡溶酶(autolysin：Ly捌)是S船缨戆壁上一个藏疫德守戆蛋瞧分子， 有关潦料提示，该分子可能是一个抗感染的痰苗候i刳亢原分子。人类鼻咽部携带 的蔓pn构成了S伽主要的天然储藏撵，并且被认为是S朋性疾病的前奏。如 果能谈少S嬲戆魏嫠量，爨姆鸯动于跨低曼嬲爨致痰瘸发生夔咒率或严重程度。 目前认为：控制人一人之间的传播可能主要依靠黏膜表面的免疫反应。因此，开 展重缀置钟如棚黏膜免疫效槊的实骏研究，对于发展新型抗S册感染疫苗具 骞重要豹理论意义鞠港在戆实嚣瘦霜徐壤。 本研究目的：评价重组缈删(recombinantLy删： Re一巧删)滴爨诱导小 鼠抗S册感染的保护性免疫效果。 篁茎塞熊：!：萋黧婆兰 研党内容襄方法： 取出牛奶僳种的冀删23F血清挺菌株SHl37，按种到新鲜的含商庆大霉素的哥 6 舱比驻啦璩滕板上。37c滠弯18小融；②建改逶纛氏法，诗篓SHl37对BALB／C 小鼠腹腔注射的半数至延量；③按照109CFU／只翦翔量对BALB／e小鼠漓彝感染， 观察小鼠募咽s俐定植情况。 2．R9一妇翻漩爨诱最小鼹产生撼s珊感染瓣免疫效暴鹣谬徐。①建e～勿捌 MS鉴定；②翅缝化熬Re 盎。对缝化产物进行SDS魄泳分孛厅襄MALDI～TOF 一匆删俸必抗原，以cp6俸佐剌，濂鼻接种BALB／c，j、鼠，鼹牲对照组鲻嚣麓麓 水滴弊，阳性对照组采用23价多糖疫苗肌肉涟射；③于束次兔疫后2周即攻击 之蘸，采鬃小鬣盘瀵耪势嚷灌浚波嚣撵晶，慕溺ELISA溅试特羚链撬俸承乎；④ 用St[137麓拣分别以瀵爨_荦珏腹验注龛圣薅秘方式避行攻击感染；⑤漓鼻竣毒鹰4 天，采集小鼠血液、鼻嘲灌洗液和脯灌洗液，进行筛选性培养，并计数量删蔺 落数；密惦鼹察并记蒙黢齄注射玫壹感染岳14爨淹各缰小藏恁亡壤况。 磷究结果： 8Ht37为spn低毒力拣，著成功建立了无蓥敷瘥龅薅蓥型S,on感染书簸模受。 2。Re--LytA漓舞免疫最，实验小鼠产生了筑如鲥的特异性撬体(包搔IgG、 IgA、SIgA)。 3。羧黢淀射攻蠢感染螽，Re一如列漆奏鳃疫缀小鬣的惩亡察与多耱疫饕缀 无差羚(PO+05)；浚舞玻彘感染露，Re一谚嬲瀵爨受疫组霁骥帮灌洗液培莽诗 数明擞低于阴性对照组和多糖疫荫组(P0．05)。 缝论：疑一勿搬滚爨霹诱警激L8盎枣鼠产生羝撬譬p撺感染懿爨妒镶受疫 力，这辩保护牲懿熊疫力霹毖与褥异健SIgA搬关。 关键镄：重组鑫溶黪Re—Lxtn)、鼙炎链球蘩，漆葵兔癀、BALB／c小鬣 i| 汁慧采硕士学位论文 IntranasalImmunizationswith InducesBALB／c Re--LytA MicetOProducetheProtective Immunityagainst Localand PneumococcalInfection Systemic MasterCandidate：Gan