肾上腺髓质素对大鼠肝星状细胞凋亡影响初步研究.pdf

肾上腺髓质素对大鼠肝星状细胞凋亡影响的初步研究 摘 要 目的：观察肾上腺髓质素(ADM)对体外培养的活化正常大鼠肝星状细 胞凋亡的影响，初步探讨在肝纤维化形成过程中ADM对星状细胞凋亡的 作用及其意义，以期为临床治疗／预防肝纤维化和早期肝硬化提供理论依 海中医药大学肝病研究所，该细胞系由美国加利福尼亚旧金山总医院肝病 5％C02常规培养，2—3天传代1次。待细胞达到试验所需数量后，取生 长良好的HSC．T6，经O．25％胰酶消化，用培养基制备细胞悬液，使细胞 共2板。临用前将ADM0．1mg(合1．745X 101．t 0．349X10～mol／m1)，TNF．a g溶解于10ml培养基。接种后的细胞继 续培养24小时后进行以下分组：I组：空白对照组，加培养基0．5ml；II la 组：TNF．Q组，加TNF．aO．012ml，培养基0．488ml，至终浓度8 g，L； ADM0．0043ml、TNF—Q 8mol／L、TNF．d终浓度8H 加ADM0．043ml、n咂-d 加ADM0．43mi、TNF—d u ％ol／L、n师-a终浓度8 g／L，每板各组均设3复孔。加试剂后各组细胞 继续培养24小时和48小时，各取1板细胞(每组3复孔)，进行如下操作： ①加胰酶后用吸管充分吹打各孔，使细胞脱壁分散。将细胞悬液吸入流式 上机管，1000dmin，离心5分钟，弃上清；②每管内加入2mlPBS吹打混 1×的结合 匀，500Yg、4C、离心5分钟，弃上清液；③每管加100uL X p 缓冲液，制成5 105cells／mL的细胞悬液；④每管细胞悬液加入51膜联 u1 蛋白．异硫氰酸荧光素溶液和2．5 PI，置于漩涡混合器上轻轻混匀：⑤将 u1 1×的结合缓冲液，置于 试管置于暗处孵育10分钟后，每管加入400 漩涡混合器上轻轻混匀；⑥以流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡情况。对 各组凋亡率进行比较，分析：①不同浓度肾上腺髓质素对大鼠肝星状细胞 凋亡的影响；②不同时间段肾上腺髓质索对大鼠肝星状细胞凋亡的影响； ③n吓．Q对大鼠肝星状细胞凋亡的影响；④肾上腺髓质素对n吓一Q诱导 大鬣瓣星菰鞠麓凋亡静影嗡。结栗：①空自对照缝HSC-T624小时凋亡率 素低浓度组}壬SC矗6 (9．07±0．69)％；中浓度组HSC．T624小时凋亡率为(7。99±0．36)％， 48小时凋亡率为(24。14+2。57)％：高浓度组HSC—T624小时凋亡率为(5．61 24 24小时凋亡率为(21。80走 ④蟹上艨髓震索低浓度÷融媒．矗组HSC—T6 Q组HSC．T6 24小时凋亡率为 -4-1．68)％；肾上腺髓质素高浓度+TNF—a组HSC—T6 鼠肝星状细胞存在凋亡，肾上腺髓质素可降低活化的HSC的凋亡率，且呈 剂量依赖性；②肿瘤坏死因子．a可诱导活化的大鼠肝星状细胞凋亡；③肾 上腺髓质素可抑制肿瘤坏死因子．a诱导的活化的大鼠肝星状细胞的凋亡。 关键词：肾上腺髓质素：肝星状细胞；肿瘤坏死因子．Q；细胞凋亡