实验一 植物细胞减数分裂.docVIP

实验一 植物细胞减数分裂 一、实验目的 (1)掌握制备植物细胞减数分裂玻片标本的技术和方法。 (2)了解高等植物细胞减数分裂过程，观察染色体的动态变化。 二、实验原理 分裂是生物在形成性细胞过程中的一种特殊方式的细胞分裂，在此过程中先由有性组织(花药或胚珠)中的某些细胞分化为二倍性的小孢子母细胞或大孢子母细胞，这些细胞连续进行两次细胞分裂即减数第一次分裂和减数第二次分裂。结果一个小孢子母细胞形成4个小孢子．一个大孢子母细胞形成一个大孢子，它们都只具有单倍的染色体。 减数分裂在遗传上具有重要意义。性母细胞(2n)经过减数分裂形成染色体数目减半的配子(n)。经过受精作用．雌雄配子融合为合子，染色体数目恢复2n。这样在物种延续的过程中确保了染色体数目的恒定，从而使物种在遗传上具有相对的稳定性。另外在减数分裂过程中包含有同源染色体的配对、交换、分离和非同源染色体的自由组合，这些都是遗传学分离．自由组合和连锁互换规律的细胞学基础。在这些基本规律的作用之下，导致了各种遗传重组的发生，而遗传重组又是生物变异的重要源泉。 在适当的时候采集植物的花蕾制备染色体标本就可在显微镜 下观察到植物细胞的减数分裂。 三、实验材料 蚕豆(Vicia．faba，2n=12)花药、玉米(Zea mays，2n=20)花药、小麦(Triticum spp．2n=42)花药、大葱(Allium fistulosum 2n=16)花药、桔(Citrus sinensis 2n=18)花药、洋葱(Allium cepa 2n =16)花药、番茄(Lycopersicum escuSentum 2n=24)花药。 四、实验器具和药品 1．器具 显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、大培养皿、酒精灯、吸水纸。 2．药品 无水乙醇、醋酸洋红染液、石蜡、二甲苯、固定液(甲醇：冰醋酸：3：1)、加拿大树胶、正丁醇或叔丁醇。 五、实验步骤 1．取材 在一朵花的减数分裂的全过程中能观察染色体的时间是很短的，一般在终变期，中期I，后期I。因此，选取刚现蕾的花序是观察花粉母细胞减数分裂的关键步骤,要注意花蕾的形态和大小，适时选材。 (1)玉米 北方的玉米5月份取材，时间以上午8:30为好，夏玉米一般在7月份取材，以上午7:00一8:00为好,在玉米雌穗未抽出前的7—10天手摸植株上部(喇叭口下部)有松软感觉，表明雄花序即将抽出。用刀在顶叶近喇叭口处纵向划一刀，切口长10一15cm，剥出雄花序，顶端花药长3—5mm，花药尚未变黄时取材。 (2)蚕豆：从现蕾开始，上午10:00—11:00可选取2—3mm大小的花莆或一小段花序。蚕豆开花的次序是由下而上，由外而内。 (3)小麦：在植株开始挑旗，旗叶与下一叶片的叶耳间距约为3一4Cm,花药长度大致在1.5—2.0mm,黄绿色时取材最好。如花药为绿色时取材则为时过早,花药为黄色，则已过时。上午7:00一8:00为取材最佳时间。 (4)大葱：在北方地里越冬的大葱，第二年春季3—4月长出花序，待花序长出，颜色呈绿色，花蕾长度在3～4mm，花药长度为1—1.1mm时取材。上午9:00一10:00为最佳取材时机。 (5)洋葱：4—5月长出花序，同上。 (6)番茄：5—9月均可取材，时间以上午8:30—9:30为好，花蕾以3—4mm为宜(番茄花期持续时间长，可随时取材)。 (7)桔：桔花吐蕾时,在上午8:00一12:00取3—9mm的花蕾为宜。 2．固定 通常制作幼小花药压片时，可不经固定，直接放在醋酸洋红染液中，同时进行固定和染色，但是先经固定的材料容易着色、分色及便于保存。固定时将采集的材料置于卡诺氏固定液12—24小时，若不及时制片，可将固定后的材料用70%的乙醇冲洗直至闻不到醋酸味为止，后放入70%乙醇中存于4℃冰箱内，可随时取用。 3．染色制片 用蒸馏水将从固定液或从70％酒精保存液中取出的花蕾冲洗数遍，然后剥开花雷，放在载玻片上，用解剖针及虹膜刀将花药横切成3—4段(或纵切)，加一滴醋酸洋红染液于材料上，用解剖针轻压花药使花粉母细胞从切口出来，静止染色5—10分钟，除去花药壁。加上盖玻片使染液刚好布满载玻片与盖玻片之间成一薄层(不可过多，过多花粉母细胞会逸出盖玻片边缘)，加上盖玻片后，在酒精灯上轻微加热，以利于进一步着色和染色体的分散。在盖玻片上覆以吸水纸用拇指适当加压．把周围的染液吸干(勿使盖片移动)，若细胞质染色过深，可在盖玻片的一边滴加45％的醋酸，在另一边用吸水纸吸，让醋酸从盖玻片下流过，减轻细胞质的着色程度。 4．镜检