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干细胞在心律失常的应用 构建生物起搏器 SSS 重建房室传导通路 AVB 1.上调细胞β肾上腺能活性 β2受体基因转染到心脏一个位点的心肌细胞，使其过度表达β 肾上腺能活性，使心率增加。 2. 减少细胞膜复极电流 意义 Ik1电流使静息膜电位保持在负电位，因此它抑制心脏兴奋性。 抑制Ik1可使心室肌细胞转换为起搏细胞 细胞内定位转染Kir2.1AAA能够建立生物起搏点，以达到治疗目的 此技术存在的问题：可产生局灶异位自发节律，与心室节律竞争 动物实验① Qu等在 2003年把包含HCN2的腺病毒注射到犬左房内 优势 胚胎干细胞为全能干细胞，具有建系传代、全能分化、干细胞永生化、增殖能力强等方面优势 问题 一、胚胎干细胞具有向终末细胞分化的特性，而分化为终末细胞则失去起搏特性。因此精确控制干细胞分化并终止于窦房结细胞阶段是一个绝技 二、尚不清楚具备起搏功能的胚胎干细胞，是否具有人类心脏起搏细胞同样的离子通道 限制 社会伦理问题 胚胎干细胞具有致心律失常源性 胚胎干细胞具有免疫源性 致肿瘤性 优点 间叶干细胞容易分离培养 多系分化增殖 无免疫排斥 不存在伦理问题 易于分化诱导为自律细胞 实验理论基础 移植骨髓细胞在体内可分化为典型的心肌细胞与血管内皮细胞 移植骨髓细胞可与宿主细胞建立缝隙连接 移植细胞可替代损伤的窦房结发挥自律起搏功能 可建立生物起搏器 实验 1－体外模型 将装载GFP＋HCN2基因干细胞以点状种植于载玻片上 其周围种植新生大鼠心室肌细胞 建立以干细胞为中心，心肌细胞在周围的类似窦房结样结构 在装载HCN2干细胞周围的心肌细胞，其自发搏动节率明显快于对照组的节率 实验 2－体内模型 将装载起搏基因的间叶干细胞直接点状注射到犬左室心外膜 注射装载HCN2+GFP干细胞的犬有自发心室节律，频率大约60bpm，起搏点位于注射部位 在注射点可检测到装载荧光标志GFP的成人间叶干细胞 证实移植干细胞之间、干细胞与宿主心肌细胞之间形成了缝隙连接 实验一 干细胞移植治疗房室传导阻滞 Xiaoqing Ren, et al. Cardiac atrioventricular conduction improved by autologous transplantation of mesenchymal stem cells in canine atrioventricular block models. J Geriatr Cardiol, 2007, 4(4): 238-243. 实验二 组织工程技术重建房室传导功能 Choi YH, et al. Cardiac conduction through engineered tissue. Am J Pathol. 2006 ;169(1):72-85 组织工程技术重建房室传导功能 分离和培养大鼠成肌干细胞 制备三维结构的组织工程移植物2×2×2mm 组织工程技术重建房室传导功能 开胸将三维组织工程移植体缝埋到动物房室沟内 移植体内的干细胞具有缝隙连接功能 组织工程移植体具备电传导功能 结论 移植干细胞可与宿主细胞建立缝隙连接，具备传导功能 移植干细胞可替代损伤的房室结发挥传导功能 分化干细胞移植或组织工程技术改善、重建房室传导功能，有望取代电子起搏器 社会伦理问题 致心律失常源性 具有免疫源性 致肿瘤性 展望 干细胞及转基因干细胞移植构建生物起搏器，组织工程重建房室传导，为缓慢性心律失常病人的治愈带来希望 生物起搏器和组织工程技术替代电子起搏器是未来发展的方向 虽然近来的研究结果令人鼓舞，但真正应用于临床尚有很多路要走 中国医学科学院 阜外心血管病医院 任晓庆 干细胞在治疗心律失常方面的应用 第一部分 构建生物起搏器 3.增加舒张期内向电流 4.将干细胞调控为自律细胞 2.降低细胞复极电流 1.上调细胞β肾上腺能活性 5.将干细胞转染起搏基因 构建生物起搏器的方法 β2受体基因质粒 心率增加40％ Ik1内向整流电流 窦房结细胞 心室肌细胞 Ik1内向整流电流 2002、2003年 Miake在 Nature Ik1编码基因是Kir2.1 重组基因Kir2.1AAA抑制 心室肌细胞转变为类窦房结自律细胞 建立起搏电流 If电流 If电流的基因编码为HCN,3个亚基在心脏HCN1,HCN2,HCN4 转染HCN基因可将普通细胞改变为起搏细胞 3.增加舒张期内向电流（起搏电流，If电流） HCN2基因腺病毒 注射点出现心房节律 此处心肌细胞的If电流强100倍 4.将胚胎干细胞调控为起搏细胞 5.将间叶干细胞构建为生物起搏细胞 6、转染起搏电流基因HCN 干细胞移植构建生物起搏器 Potapova I, et al. Ci