E.coli内表达渗调蛋白的功能检测及其马铃薯体内转化与研究.pdf

摘要 可吸收水分减少导致水胁迫，植物对水分胁迫产生响应适应胁迫条件，以往研究尽管已识别 了一些胁迫响应基因，但其无法解释多样的植物对水胁迫的适应。渗调蛋白OSM通过真菌细胞 壁渗透到质膜，消除其DH梯度，从而产生抗菌功能。此外，研究显示盐胁迫下植物体内OSM积 累。 本实验室在筛选干旱胁迫马铃薯消减cDNA文库时，识别了文库中高频出现的OSM基因 EST，BLAST检索发现其与OSM-3b100％同源，据记载OSM-3b是晚疫病抗性相关基因，检索结 果未见其与水胁迫响应的相关报道。本研究旨在分离获得OSM-3b基因全长cDNA，揭示其水胁 迫的响应功能，研究结果如下： OSM-3b原核表达载体pET-28c。OSM，获得了的重组菌株DH．OSM。 盐浓度升高，OSM-3b 表达明显上升。在NaCl胁迫和PEG浓度梯度渗透胁迫下，重组菌株DH—OSM菌的菌落存活数 统计分析结果显示，在不同浓度NaCI下重组菌的菌落存活数与对照趋势一致，重组菌茵落存活 数峰值出现在2．O％的PEG浓度，而对照菌峰值则出现在O．5％的PEG浓度。 这些结果表明，OSM-3b在大肠杆菌中表达对NaCl胁迫没有响应，但可缓冲渗透胁迫对其存 活的影响。 将OSM-3b置于pCAMBIAl30535S启动子下游，构建了转化载体pCAMBIAl305．OSMo 通过农杆菌介导法导入马铃薯体内，PCR检测筛选出7个阳性转化子。这些株系将有待迸一步研 究。 关键词：OSM基因，表达，NaCl胁迫，PEG胁迫 Abstract Decreaseofabsorbablewaterresultsinwaterdeficient to the stress．plantsgenerateresponseadapt some tothestresshasidentiedin isstillunclearhow studies，it stress．Althoughgenesresponse previous wallto diversestress．Osmotin functionsinceit fromcell plantadapts generatesantifungus permeates osmotin deletes inmemebrance．Inisknownthat membranceand addtion，it consequentlypHgradient insome understressof accomulates salinity． plants high osmotinWaSidentifiedwhensubtractivecDNA with ESTofa encoding libray,constructed gene ofBLASTwith oftheEST understressofwater Wasscreened．Outcome sequence potato shortage