工具型CAPP系统研究和开发.pdf

诱导血红索氧合尊一1的表达对大鼠肾 缺血再灌注损伤的保护作甩 研究生刘秉乾 导师高建光武玉东 郑州大学医学院第一附属医院泌尿外科 河南郑州450052 摘要 目的l缺血再灌注损伤 Ischemiareperfusioninjury，IRI 目前是导 致急性肾功能衰竭和影响移植器官早期功能恢复的关键因素之一，其发生机制是 多种因素造成缺血组织再灌注时组织的缺血性损伤加剧，从而使组织供血量绝对 或相对减少以及器官形态、功能、代谢等多方面发生变化。针对IRI的机制，寻 找抗损伤物质，从而达到防治IRI的目的是当今研究的主要方向。大量实验证明 自由基是IRI过程中的主要效应因子之一。现已证实自由基清除剂对减轻IRI具 有一定的作用。而进一步探讨IRI的机制，寻找更加有效的治疗措施仍是目前基 础及临床需要亟待解决的重要课题。 研究发现细胞内游离的血红素具有明显的细胞毒作用，血红素氧合酶一l Heme 物中有重要的自由基清除剂及抗IRI的因子。 本实验拟用大鼠肾IRI模型，系统观察氯化亚锡 Stannous 防治IRI的有效途径提供实验依据。 对照组 C 和实验组 D 。A组：暴露双侧肾脏并钝性分离肾周组织，切除右肾， 不夹闭左肾蒂，45分钟后关腹，24小时后取肾做各项检测。B组：皮下注射10％ u SnCl。100 i／lOOg，24小时后切除右肾，不夹闭左侧肾蒂，再经过24小时切除左 p 肾做各项检测。C组：皮下注射生理盐水i00 1／lOOg，24小时后暴露双侧肾脏， 切除右肾，夹闭左肾蒂45分钟，同时切除右肾，再灌注24小时后取左肾做各项 鼻州太摹2帅，丰曩士学批研克主单王静支 肘▲虹幸I晤— l的毫遗叶太‘ft^弄草扛攫酋曲种竹用 tt1／lOOg，24小时后处理同C组。分别 检测。D组：皮下注射SnCl：10％SnCl。100 应用免疫组织化学及双抗体夹心ELISA检测肾组织中HO一1蛋白的表达，肾组织光 镜、电镜形态学观察，并测定超氧化物岐化酶 SOD 的活性及丙二醛 MDA 的 含量，同时测定血尿素氮 BUN 、肌酐 cr 评价肾脏功能。 结果t①肾组织中H旷1的含量：A组仅有微量表达，B组、c组及D组1t0—1 疫组化染色：A组未见阳性细胞，B组及C组主要为胞浆内及上皮细胞腔面弱阳性 表达，D组肾曲小管呈强阳性表达，染色主要位于胞浆及上皮细胞的腔面，同时 各组均未发现肾小球及间质细胞染色阳性。图像分析表明：B组、c组及D组的灰 后C组及D组SOD活性均降低，MDA含量均升高，但C组与缺血前相比差异具有 显著性 尺O，01 。而D组与缺血前相比差异无显著性 户 0．05 ：同时缺血再灌 注后D组SOD活性高于C组，MDA含量低于C组，差异均具有显著性 tTO．01 ： 但与A组和B组相比差异均无显著性 f】 0．05 。④病理变化：A组及B组肾小 球、肾小管结构正常。c组肾小球内可见红细胞增多，部分肾小管细胞出现肿胀， 管腔内出现蛋白，但无炎性细胞浸润及坏死灶。D组仅见肾小球内红细胞增多。 ⑤超微结构：A组与B组肾小球、肾小管细胞结构正常；c组微绒毛稀疏、水肿， 线粒体肿胀、空泡样变性；D组微绒毛稀疏，个别线粒体空泡变性。⑥肾功能的 变化；A组与B组处理前后血cr和BUN均无明显变化 户 O．05 。肾缺血再灌注 组与缺血前相比差异显著 P O．01 。同时再灌注后D组BUN和cr均明显低于c 组 P O．01 ；而与A组和B组相比无显著差异 乃，0．05 。 结论，①大鼠正常肾组织中H沪1仅微量表达。②大鼠肾脏缺血再灌注前应 用ShEl：预处理可诱导H0-1的表达，未见对肾脏的结构和功能产生明显不良影响。 ⑧[RI可引起氧自由基生成增加，肾功能下降，同时Ho_l表达增强。④应用SnCl。 预处理诱导Ho-l的表达可部分通过清除氧自由基的毒性作用而减轻大鼠肾IR