水稻程序性细胞死亡相关基因克隆和功能分析.pdfVIP

复旦大学博士论文 摘要 摘 要 程序性细胞死亡(PCD)是生物体内高度协调的生理过程，在植物发育、分化 和压力诱导下都发挥着重要作用。在哺乳动物中很多抑制或诱导PCD的基因已经被 克隆和分析，但是却很少在植物中发现它们的同源基因。 我们先前在水稻中克隆并报道了一个与PCD相关的基因——如肋f晒它的过表 达能够使转基因植株出现多种PCD的特征。在这篇论文中，我们将对OsPDCD5基因 的特征进行详细地分析。OsPDCD5基因的cDNA全长为416bp，编码一个128aa的 蛋白质。RT-PCR分析表明OsPDCD5基因在成熟根和叶片中的表达水平分别高于幼根 和幼叶，而且在水稻杆中的表达是沿顶端到根部方向逐渐递减，说明OsPDCD5的表 达与叶片和根的衰老以及杆的发育有关。我们使用anti—OsPDCD5的多克隆抗体检测 OsPDCD5在水稻多种组织中的分布，免疫杂交结果表明OsPI)CD5在水稻叶片、叶鞘、 幼穗、杆的不同节段中都有表达，但是在花药组织中不表达。另外，我们发现uV—B 照射能诱导OsPDCD5的表达，无论是在转录水平和蛋白水平。最后，我们使用酵母 双杂交方法筛选水稻cDNA文库，获得了OsPDCD5的相互作用蛋白——类钙调磷酸酶 OsCIPK23在体外能够相互作用。 在哺乳动物中PCD被主要分成两类：凋亡和自噬。在自噬过程中，一部分细胞 质被双层膜结构包裹形成自噬体，然后靶向运输到液泡，被液泡内水解酶降解。双 层膜结构的形成与两条类泛素修饰途径有关，其中一个修饰途径是At98与PE连接 反应。At98的C末端首先被半胱氨酸蛋白酶At94切割，随后At98暴露出的甘氨酸 离了Atgs家族，但是迄今为止并没有关于水稻Atgs家族和自噬途径的研究报道。 在本论文的第二章中，我们首先在水稻中分离了两个自噬相关基因，OsAt98和 幼根、叶鞘和幼穗组织中具有一致的表达水平。为了继续研究这两个基因是否与酵 母同源基因具有相似的特点，我们对酵母中表达的OsAt98融合蛋白进免疫杂交分 复旦大学博士论文 摘要 Glyl 的研究结果相一致。另外，我们通过酵母双杂交的方法证实了OsAt98和Osht94之 间能够发生相互作用，而且发现OsAt98蛋白Glyll7的突变并不能影响它们的作用。 这些结果说明OsAt98和OsAt94在结构和功能上都是非常保守的，提示在水稻中存 在保守的自噬途径。 自噬 中图分类号：Q37 2 复旦大学博士论文 ABSTI}ACT Abstract cell a orchestratedthat Programmeddeath(PGD)ishighly processplays a rolefor differentiationandstress major plants development． during or PCDhavebeenfoundin survival．Manygenes inhibiting inducing animals， in buttheir have beenisolated homologuesrarely plants． tomammalian celldeath OsPDCDS,anortholog